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使用在線二維色譜對血清中治療性單克隆抗體進行MRM 定量的優勢

瀏覽次數:1489 發布日期:2013-6-25  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負
Catalin Doneanu、Paul Rainville和Robert S. Plumb
沃特世公司(美國馬薩諸塞州米爾福德市)
 
簡介
在定量血清中的治療性蛋白時,不進行分析物預分組分在降低檢測成本和簡化樣品制備流程方面具有一定優勢。分析物的分離(通常利用免疫親和性)需增加額外的純化步驟并使用昂貴的同位素標記的蛋白質標準品來計算分析物回收率。
 
另一種方法是采用具有較高色譜分辨率的LC系統,例如多維LC。設計用于測定復雜血清消化物(不進行分析物分餾)中治療性蛋白質的多重反應監測(MRM)分析法在使用多維色譜時可獲得更準確的結果。尤其是近年來,二維反相/反相(RP/RP)色譜在生物分析領域備受青睞。1-52D-色譜法可以更好地分離分析物與樣品中的其他組分,從而降低分析物信號的抑制作用,這一優勢極大地提高了業界對2D-色譜法的認可度。使用相同量的樣品進行分析時,2D-色譜技術相比1D LC方法具有更高的檢測靈敏度。
 
曲妥珠單抗(赫賽汀)是一種人源性IgG1 kappa單克隆抗體(mAb)。此抗體可通過基因工程6,7獲得,也就是將人類單克隆抗體的恒定區與能夠結合人類表皮生長因子受體2 (HER2)蛋白質受體的小鼠單克隆抗體的互補決定區(CDR)進行連接。這些HER2受體屬于人類癌基因蛋白家族,在大約25%的浸潤性乳腺癌中都有表達。在1998年,美國食品藥品監督管理局(FDA)批準曲妥珠單抗用于治療HER2-過度性乳腺癌。將曲妥珠單抗按照臨床劑量通過靜脈注射給藥,使HER2受體飽和。通常曲妥珠單抗的負荷劑量為4 mg/kg,之后每周劑量為2 mg/kg,從22位患者血漿中測得的曲妥珠單抗最高濃度平均值大約為70μg/mL。8
 
在本應用紀要中,我們將介紹采用高靈敏度的2D LC/MRM測定人體血清中曲妥珠單抗含量的過程,第一維反相色譜在pH 10.0下進行梯度分離,第二維反相色譜在pH 2.5下進行梯度分離。我們發現在蛋白質生物分析中采用二維高pH/低pH RP/RP色譜能夠顯著降低離子抑制作用。
 
下載完整應用紀要請點擊:http://www.waters.com/waters/library.htm?lid=134717777&cid=511436&locale=zh_CN&icid=i6713
發布者:沃特世科技(上海)有限公司
聯系電話:800(400)8202676 (免費電話支持專線)
E-mail:Jackie_qian@waters.com

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