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ELISA試劑盒開發(fā)及使用過程中的常見問題及對策

瀏覽次數(shù):3804 發(fā)布日期:2012-10-27  來源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責任自負

 

 

 

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現(xiàn)象

可能原因

解決方法

板條不顯色或者無相應數(shù)值

試劑使用順序混亂,或操作步驟出錯

嚴格遵循實驗說明重復實驗

使用了不同批次的試劑

確保試劑來自同一試劑盒

板條受潮嚴重

板條要封好,干燥劑失效要及時更換

OD

試劑過期,或者不同的批次混用

查證過期試劑和批次

洗液配制錯誤、洗滌浸泡時間過長

按照說明書要求洗滌,并正確配制洗液

孵育時間過短

按照說明書要求,嚴格計算好時間

試劑污染

確保吸取不同液體更換新的槍頭和盛放器皿

試劑溫度過低

根據(jù)試劑體積大小回溫時間相應延長,確保試劑完全回溫

使用錯誤波長讀數(shù),或者酶

標儀失靈

確保450 nm波長讀數(shù),檢查酶標儀是否故障

試劑盒處于極端的條件

使用完畢的部分請立即放回冰箱,勿置于過熱環(huán)境時間太長

過高的

背景值或吸光度(OD值)

使用了質(zhì)量差的水配制試劑

使用雙蒸水或去離子水配制試劑

洗滌不當或者洗板機洗板效果不好

增加1-2次洗滌,每孔至少加入250μL洗液

酶標儀失靈,如OD值讀數(shù)很高而顏色很淺

使用校正微孔板檢查酶標儀,檢查光源

實驗室溫度過高,反應時間過長

測定操作溫度是否合適,時間是否計算正確

試劑混淆,被污染或者配制不當

確保使用正確的試劑,準確配制,避免污染

板內(nèi)

差異性

加入標準品和樣品等的時間不一致

使用多道槍加樣,同種試劑加樣途中不能中斷

多道槍使用不當

校準多道槍,檢查吸嘴是否套緊,確保吸液量一致

洗滌系統(tǒng)出現(xiàn)故障

檢查洗滌系統(tǒng),保持良好運行

板與板之間孵育時間相差太大

獨立計時,確保一致的孵育時間

板與板之間不一致的洗滌過程

確保相同的洗滌次數(shù),保證洗滌系統(tǒng)正常運作

使用移液槍不當

檢查移液槍,確保吸取相同液量

試劑和樣品處于不同溫度

確保盒內(nèi)試劑和樣品液等充分回溫,如果試劑體積較大則需要回溫較長時間。不能用溫水浴回溫樣品

不同批次的試劑混用,或試劑盒過期

試劑不要混用,通常0標準品的OD值小于0.5顯示試劑質(zhì)量下降

一個或

多個標準品數(shù)據(jù)點超出曲線范圍

標準品添加順序混亂,或者放置于錯誤位置

按照說明要求重復實驗,保證標準品添加正確

標準品被污染或與其他標準品混淆

改用新的標準品,按照由低濃度到高濃度的順序添加標準品

洗滌不一致或者洗滌系統(tǒng)失靈

遵循一如既往的洗滌方式,檢查洗滌系統(tǒng)

加入標準品和試劑的時間不一致

由低到高濃度依次添加標準品,使用多道槍移液

多道槍使用不當

校準多道槍,檢查吸嘴是否套緊,確保吸液量一致

發(fā)布者:山東藍都生物科技有限公司
聯(lián)系電話:18266598399
E-mail:lvdukeji@126.com

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