熒光western blot應(yīng)注意些什么
隨著熒光檢測(cè)的普及，許多研究人員正考慮將western blot的檢測(cè)方法從化學(xué)發(fā)光轉(zhuǎn)到多重?zé)晒狻＿@一趨勢(shì)背后有多個(gè)推動(dòng)力。最重要的是，熒光檢測(cè)能夠?qū)崿F(xiàn)多重western blot分析，每次能夠同時(shí)檢測(cè)幾個(gè)目標(biāo)蛋白，而不再需要?jiǎng)冸x和重新雜交。熒光的其他好處在于動(dòng)態(tài)范圍更寬、信號(hào)穩(wěn)定性更好。
熒光blotting的小貼士
• 抗體濃度應(yīng)當(dāng)優(yōu)化，在幾種不同稀釋度的抗體中孵育膜。選擇信噪比最高的稀釋度。
• 從化學(xué)發(fā)光轉(zhuǎn)到熒光檢測(cè)時(shí)，一抗?jié)舛葢?yīng)當(dāng)增加；通常來(lái)說(shuō)是增加2-5倍。二抗?jié)舛瓤赡芤残枰獌?yōu)化；1:5,000稀釋是個(gè)不錯(cuò)的起點(diǎn)。在使用特定抗體時(shí)，可以參照生產(chǎn)商的建議。
• 為了讓信噪比最高，應(yīng)使用自發(fā)熒光低的膜，如 Immun-Blot® low fluorescence (LF) PVDF membrane。
• 許多封閉液都成功用于熒光檢測(cè)。我們建議使用0.5-5% 酪蛋白、最多5%的脫脂奶粉，或最多3% BSA，溶于TTBS中。
• 緩沖液中的顆�？赡芡Ａ粼谀ど希⒃斐蔁晒饧傧蟆Ｖ皇褂酶哔|(zhì)量的試劑，并對(duì)所有緩沖液過(guò)濾滅菌。
• 使用鈍的鑷子從邊緣操作。避免劃破膜或弄皺，這會(huì)在熒光檢測(cè)時(shí)造成假象。
• 使用鉛筆來(lái)標(biāo)記膜，因?yàn)樵S多墨水都會(huì)發(fā)出熒光。
• 溴酚藍(lán)會(huì)發(fā)出熒光。確保染料與樣品已分開，切掉凝膠上包含染料的部分，或省掉樣品緩沖液中的溴酚藍(lán)。
• 無(wú)需在暗處開展免疫檢測(cè)；正常的室內(nèi)燈光不會(huì)使熒光標(biāo)記的抗體發(fā)生光漂白。不過(guò)，熒光標(biāo)記抗體的儲(chǔ)液應(yīng)保存在暗處。
• 在處理膜時(shí)，使用無(wú)粉末的手套，以避免膜上出現(xiàn)假象或指紋。
多重分析的小貼士
• 使用來(lái)自不同宿主的一抗（如小鼠和兔）。兩個(gè)親緣關(guān)系相近物種的抗體（如大鼠和小鼠）通常會(huì)造成交叉反應(yīng)，即使抗體已經(jīng)過(guò)交叉吸附。
• 使用經(jīng)過(guò)交叉吸附的二抗，以避免交叉反應(yīng)。
• 使用光譜上不同的熒光基團(tuán)偶聯(lián)物，避免交叉通道熒光。
• 在同時(shí)檢測(cè)多個(gè)目標(biāo)之前，單獨(dú)優(yōu)化每個(gè)目標(biāo)的檢測(cè)。由于一些一抗并非很特異，在膜上會(huì)產(chǎn)生多條帶，故多重實(shí)驗(yàn)之前的單目標(biāo)檢測(cè)將有助于確定每個(gè)抗體的條帶模式。
• 大部分膜在波長(zhǎng)較短的激發(fā)光下會(huì)顯示出較高的背景。記住，在藍(lán)色通道檢測(cè)最強(qiáng)的目標(biāo)，在綠色通道檢測(cè)中等目標(biāo)，而保留紅色通道來(lái)檢測(cè)最弱的目標(biāo)。
- 胡桃源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒說(shuō)明書
- 檢測(cè)試劑盒在流感防控檢測(cè)中的應(yīng)用
- 豬乙腦病毒抗體檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫法）使用說(shuō)明書
- 血液樣本進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)時(shí)的干擾及解決方法介紹
- 免疫球蛋白G（IgG）在免疫系統(tǒng)中的作用及應(yīng)用場(chǎng)景
- 恙蟲病抗體ELISA試劑盒應(yīng)用于恙蟲病早期精準(zhǔn)診斷
- 實(shí)驗(yàn)室常用鱟試劑儲(chǔ)存與使用要點(diǎn)全面解析
- 美德聲定型試劑助力抗A、抗B、抗D和反定細(xì)胞等常規(guī)血型檢測(cè)
- 科德角國(guó)際熱烈歡迎旭化成醫(yī)療器械蒞臨開展現(xiàn)場(chǎng)評(píng)審
- 熱烈慶祝西美杰正式成為 Virusys 品牌代理商！
- 科潤(rùn)達(dá)生物多元化檢測(cè)產(chǎn)品亮相第22屆CACLP
- 特價(jià)促銷：蘭博利德免疫沉淀試劑盒買贈(zèng)活動(dòng)開始啦
- 科潤(rùn)達(dá)生物與您相約2025杭州CACLP展會(huì)
- 科德角國(guó)際獲北京市專精特新與創(chuàng)新型中小企業(yè)認(rèn)證
- 科德角國(guó)際旗下實(shí)驗(yàn)室阿克庇斯獲CNAS資質(zhì)認(rèn)證
- 美德聲推出豬囊尾蚴抗體檢測(cè)試劑盒和免疫IFA產(chǎn)品
Copyright(C) 1998-2025 生物器材網(wǎng) 電話：021-64166852;13621656896 E-mail：info@bio-equip.com