韩国免费A级作爱片无码_亚洲欧洲精品成人久久av18_亚洲国产成人AV毛片大全_成年人在线免费看的惊悚动作片_一级爽片_爱爱免费

English | 中文版 | 手機(jī)版 企業(yè)登錄 | 個(gè)人登錄 | 郵件訂閱
當(dāng)前位置 > 首頁 > 技術(shù)文章 > LaVision雙光子顯微鏡-呼吸道網(wǎng)絡(luò)中的神經(jīng)元活動(dòng)

LaVision雙光子顯微鏡-呼吸道網(wǎng)絡(luò)中的神經(jīng)元活動(dòng)

瀏覽次數(shù):4307 發(fā)布日期:2012-8-21  來源:http://www.qd-china.com/yingyong1.aspx
Glycinergic interneurons are functionally integrated into the inspiratory network of mouse medullary slices
Stefan M. Winter & Jens Fresemann & Christian Schnell & Yoshitaka Oku & Johannes Hirrlinger & Swen Hülsman
 
摘要:呼吸道網(wǎng)絡(luò)中的神經(jīng)元活動(dòng)功能性地依賴于抑制性突觸傳遞。我們使用雙光子顯微鏡分析了獨(dú)立吸氣“pre-Bötzinger”復(fù)合物驅(qū)動(dòng)網(wǎng)絡(luò)的節(jié)律性切片。通過在吸氣相關(guān)的呼吸過程中分別升高或降低細(xì)胞溶質(zhì)內(nèi)自由鈣離子的濃度,我們識(shí)別出吸氣(96%)和“緊張性”呼氣(4%)神經(jīng)元。而且,在GlyT2啟動(dòng)子控制下表達(dá)EGFP的BAC轉(zhuǎn)基因的小鼠中,鈣離子成像的50%的吸氣神經(jīng)元被甘氨酸化。切片中甘氨酸化神經(jīng)元的吸氣過程通過整個(gè)細(xì)胞記錄的形式確認(rèn)。我們同樣發(fā)現(xiàn)了接受來自其它甘氨酸化神經(jīng)元相位抑制的甘氨酸化神經(jīng)元。我們的鈣離子數(shù)據(jù)表明在節(jié)律性切片中的“pre-Bötzinger”復(fù)合物驅(qū)動(dòng)網(wǎng)絡(luò)中的甘氨酸化神經(jīng)元包含了大量的吸氣神經(jīng)元。
 
材料與方法
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
    野生型和在甘氨酸化神經(jīng)元中表達(dá)綠色熒光蛋白EGFP的BAC(GlyT2-EGFP)轉(zhuǎn)基因小鼠被飼養(yǎng)在大學(xué)醫(yī)院Göttingen的動(dòng)物飼養(yǎng)設(shè)施中,并按照德國生理學(xué)會(huì)、lower saxony州和德意志聯(lián)邦共和國的相關(guān)指導(dǎo)進(jìn)行喂養(yǎng)。野生型和BAC(GlyT2-EGFP)轉(zhuǎn)基因型小鼠被用于制備雙光子激發(fā)顯微鏡切片,只有BAC(GlyT2-EGFP)轉(zhuǎn)基因小鼠被用于完整細(xì)胞記錄和免疫組織化學(xué)研究。
 
雙光子激發(fā)顯微鏡的鈣離子成像
    腹側(cè)呼吸列的鈣離子成像由基于商業(yè)掃描頭(TriM Scope,LaVision BioTec,Bielefeld,Germany)的用戶定制的雙光子顯微鏡實(shí)現(xiàn)。在這個(gè)掃描頭中,脈沖紅外激光束可以被分解為高達(dá)64個(gè)一連串的焦點(diǎn),在沒有增加光損傷的同時(shí)增加單位時(shí)間內(nèi)發(fā)射熒光的數(shù)量。掃描頭被安裝在一個(gè)固定載物臺(tái)的正置顯微鏡(Axioscope FS2, Zeiss, Oberkochen, Germany)上,使用X40(0.8NA)或X63(1.0NA)的水浸物鏡(Zeiss, Oberkochen, Germany)。雙光子激發(fā)通過一個(gè)裝配了寬帶光學(xué)器件的Ti:Sa激光器(MaiTai BB, Spectra Physics, Darmstadt, Germany)獲得。對(duì)于釋放熒光的場(chǎng)檢測(cè),我們使用CCD相機(jī)(Ixon 885 Andor Technology, Belfast, Northern Ireland, or PCO; Sensicam QE; Kehlheim, Germany) 快速鈣離子成像我們使用多束激光模式(16 或32 束),掃描場(chǎng)為200 X 200μm (Ixon camera) or 170 X 220μm (Sensicam QE)。曝光時(shí)間為25–40 ms (4×4 binning=255×256 pixel) ,采樣頻率為10 到 30 Hz. 為了獲取更高的分辨率,激發(fā)光束增加到64束,以長積分時(shí)間的非像素聯(lián)合模式成像。激光能量用掃描頭中的半波板和偏振層板控制,以“ImSpector”成像軟件(LaVision BioTec, Bielefeld, Germany)控制,  10μm 步長的3D堆棧使用一個(gè)piezo-focus (Physik Instrumente, Karlsruhe, Germany)來確定深達(dá)100μm的呼吸神經(jīng)元的空間分布。 組織更深處的細(xì)胞無法確認(rèn)邊界。顯微鏡也裝配了兩個(gè)光電倍增器(Hamamatsu Photonics, Hamamatsu,Japan)用于非掃描熒光檢測(cè),用于高分辨率掃描和1μm的z軸堆棧 (Fig. 2).
 
主要結(jié)果
Fig. 1節(jié)律性切片中呼吸神經(jīng)元的雙光子激發(fā)顯微圖像。
A由多焦點(diǎn)雙光子激發(fā)顯微鏡觀察到的俄勒岡綠BAPTA1-AM (OGB-1-AM) 標(biāo)記的位于腹側(cè)呼吸列中的神經(jīng)元。b.一次較大的呼吸活動(dòng):ΔF圖像在C中型號(hào)標(biāo)記的時(shí)刻獲取,展示了5個(gè)神經(jīng)元細(xì)胞(箭頭處)中的鈣離子濃度變化(橙色)。c 同時(shí)記錄了群場(chǎng)勢(shì)能(∫)和細(xì)胞內(nèi)自由細(xì)胞溶質(zhì)鈣離子瞬變。C中的跟蹤曲線表示了來自5個(gè)呼吸神經(jīng)元(a、b中箭頭處)的鈣離子變化(ΔF/F0)。d.俄勒岡綠BAPTA1-AM標(biāo)記的呼吸神經(jīng)元。e. 交叉區(qū)域(CC)呼吸神經(jīng)元鈣離子信號(hào)的假彩圖。紅色表示吸氣神經(jīng)元 (CC>0.8),藍(lán)色表示一個(gè)呼氣神經(jīng)元的吸氣抑制 (CC<0.3)。f.d和e中表明的三個(gè)神經(jīng)元鈣離子變化(ΔF/F0)及場(chǎng)勢(shì)能(∫)的同步記錄
g循環(huán)觸發(fā)的十次連續(xù)呼吸活動(dòng)的與f中數(shù)據(jù)同樣的平均值
Fig. 2 延髓尾段中EGFP標(biāo)記的甘氨酸化神經(jīng)元的分布
a–c 概觀了BAC(GlyT2-EGFP)-小鼠EGFP標(biāo)記的甘氨酸化神經(jīng)元 (a) 和延髓尾段中膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶(ChAT)的表達(dá) (b). ChAT抗體使用Cy5結(jié)合的熒光二抗通過共聚焦激光掃描顯微鏡檢測(cè)。C中顯示了兩個(gè)通道的疊加。
d–f通過高水平CHAT表達(dá)確認(rèn)的疑核區(qū)域放大。 (e).疑核致密部發(fā)現(xiàn)的非甘氨酸化神經(jīng)元. f.d和e的疊加,揭示CHAT陽性神經(jīng)元中沒有EGFP的表達(dá)。XII舌下神經(jīng)核,IO下橄欖體,10N迷走神經(jīng)背核,AMB 疑核。g.這一版顯示了甘氨酸化神經(jīng)元的形態(tài)。82幅圖像合成的最大密度投影,來自于雙光子激發(fā)顯微鏡掃描(步長1um)
Fig. 3 甘氨酸化神經(jīng)元中節(jié)律性鈣離子瞬變。a 通過雙光子在900nm激發(fā),以帶有CFP優(yōu)化濾波器(465–495 nm)的CCD檢測(cè),確認(rèn)GlyT2-EGFP神經(jīng)元(箭頭)b 通過使用800nm激發(fā)波長和一個(gè)501–551 nm發(fā)光帶通濾波器顯示和測(cè)量的 OGB-1-AM熒光.所有的GlyT2-EGFP 細(xì)胞 (a) 都被OGB-1-AM (b)標(biāo)記. c 從甘氨酸化神經(jīng)元細(xì)胞記錄的胞內(nèi)自由細(xì)胞溶質(zhì)鈣離子瞬變。跟蹤曲線的條數(shù)相應(yīng)于圖像a和b中神經(jīng)元的個(gè)數(shù)。下面的跟蹤曲線(∫)顯示的是來自preBötC的積分的群場(chǎng)勢(shì)能。d 實(shí)驗(yàn)的圖像綜合。左軸(白色)顯示吸氣EGFP表達(dá)的甘氨酸化神經(jīng)元(占總甘氨酸化神經(jīng)元)的比例,右軸(黑色)顯示的是吸氣甘氨酸化神經(jīng)元(占總吸氣神經(jīng)元)的比例。數(shù)據(jù)基于5張切片的20幅圖像,以mean±SEM 的形式給出。
發(fā)布者:Quantum量子科學(xué)儀器貿(mào)易(北京)有限公司
聯(lián)系電話:010-85120280(聯(lián)系我時(shí),請(qǐng)說明是在生物器材網(wǎng)了解)
E-mail:info@qd-china.com

用戶名: 密碼: 匿名 快速注冊(cè) 忘記密碼
評(píng)論只代表網(wǎng)友觀點(diǎn),不代表本站觀點(diǎn)。 請(qǐng)輸入驗(yàn)證碼: 8795
Copyright(C) 1998-2025 生物器材網(wǎng) 電話:021-64166852;13621656896 E-mail:info@bio-equip.com
主站蜘蛛池模板: 色翁荡熄又大又硬又粗又视频图片 | 成人福利片在线 | 亚洲日韩欧美国产高清αv 成年人在线播放 | 人人爽人人爽人人爽 | 少妇下面好紧好多水真爽播放 | 极品美女一级毛片 | 亚洲欧美精品AAAAAA片 | 久久不见久久见免费影院视频观看 | a级一片男女牲交 | 亚洲AV永久无无码精品一区二区三区 | 国精无码欧精品亚洲一区 | 91精品视屏| 欧美激情在线免费观看 | 精品色哟哟 | 国产伦精品一区二区三区视频孕妇 | 成人免费看WWW网址入口 | 国产精品影视在线 | 玩弄少妇人妻中文字幕 | 欧美h版在线观看 | 亚洲有码转帖 | 91福利國產在線在線播放 | 国产成人欧美一区二区三区 | 91精品视频免费看 | 国产精品成人免费综合网 | 亚洲国产中文在线二区三区免 | JIZZJIZZJIZZ少妇 | 自拍1区 | 黄色精品网站在线观看 | 麻豆四区 | 欧美一级大片在线视频 | 久草免费福利在线 | 日韩精品――色哟哟 | 精品成人乱色一区二区 | 国产精品一区hongkongdoll | xxxx内射美国老太太 | 131美女爽爽爽爱做视频 | 不卡中文字幕在线5 | 精东久久 | 国产一区二区成人h动漫精品 | 久久午夜无码人妻鲁丝片午夜精品 | 99精品国产在热久久新国产在 |