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使用超高效合相色譜(ACQUITY UPC2™)系統測定甲糖寧(tolbutmide)色譜含量

瀏覽次數:1634 發布日期:2012-6-5  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負
 
目的
利用沃特世(Waters®)ACQUITY UPC2™系統,成功地將測定甲苯磺丁脲藥物含量的美國藥典正相HPLC方法轉換為超臨界流體色譜方法。
 
背景
超臨界液體色譜(SFC)是一種正相色譜分離技術,其使用CO2作為主要流動相,通常使用極性溶劑(如MeOH)作為改性劑。由于SFC的原理與HPLC的原理相似,因此,目前的方法應該能夠轉換成SFC方法,從而減少溶劑的用量和處理,降低每次分析的成本,同時增強環境方面的保護。轉換成SFC的色譜方法必須保持數據質量,而且必須得到與目前正相色譜方法一致的實驗結果。目前,美國藥典(USP)規定了含有甲糖寧(苯磺酰胺,CAS # 64-77-7)藥物的正相HPLC方法。利用4.0 x 300 mm的硅膠柱(L3)進行等度分離,流速1.5mL/min,流動相為475:475:20:15:9的正己烷:水飽和的正己烷溶液:四氫呋喃:冰醋酸的混合溶液,運行時間約為20分鐘。如大多數藥典中的方法一樣,本方法經過驗證且可靠。但是,分析過程使用
了含有正己烷和四氫呋喃的復雜流動相混合溶劑。出于環保和成本的原因,許多實驗室都希望杜絕這些溶劑的使用。
 
這種新型的超高效合相色譜(UPC2™)方法得到的數據與目前的HPLC方法相當甚至更好,速度是目前的HPLC方法10倍,且消耗的溶劑更少。
 
解決方案
將甲糖寧與內標物甲糖寧混合,利用目前USP方法制備和分析樣品。分析結果與使用ACQUITY UPC2方法得到的結果進行對比。UPC2方法的條件如下:
 
色譜柱: ACQUITY UPC2 BEH,3.0 x 100 mm,1.7微米
溫 度: 50 °C
流動相: 95% CO2:5%甲醇/異丙醇 (1:1),含 0.2% TFA
流 速: 2.5 mL/min
背 壓: 120 Bar/1740 psi
檢測器: UV /PDA ,254 nm
 
目前的正相HPLC方法,獲得仍可接受的色譜分離(見圖1),雖然內標物色譜峰拖尾嚴重(拖尾因子1.65)。由于已經通過了所列出的適應性標準(重復進樣的相對標準偏差不超過2.0%;妥拉磺脲和甲糖寧的分離度R不小于2.0),因此也沒有再作進一步的改進。

使用超高效合相色譜(ACQUITY UPC2™)系統測定甲糖寧(tolbutmide)色譜含量

由新開發的UPC2方法得到的結果,同樣符合美國藥典適應性的要求(甲糖寧和妥拉磺脲的保留時間RSD值分別為1.2%和0.9%,兩個化合物的面積RSD值小于0.90%,n=6),保持兩個目標化合物間分離度(R = ~15)的同時,運行時間大大縮短。內標物妥拉磺脲拖尾現象得到大大改善(拖尾因子1.2)。需要注意的是,利用UPC2從混合物中分離并檢測出許多小峰,說明了本方法具有很高的分離效率。本例中,每次正相HPLC分析大約使用29mL正己烷和各少于1mL的四氫呋喃和乙醇。相比之下,UPC2方法中每次進樣大約使用0.25mL的甲醇和異丙醇。這說明,通過將正相HPLC方法轉換為UPC2方法,可以大大地減少有機溶液的使用。根據目前的溶劑價格,每次正相HPLC分析的成本大約是1.40美元,而每次UPC2分析的成本大約是0.01美元,說明通過將正相HPLC方法轉換為UPC2方法可以大大地降低成本。

使用超高效合相色譜(ACQUITY UPC2™)系統測定甲糖寧(tolbutmide)色譜含量

總結
使用ACQUITY UPC2,可以成功地將美國藥典的HPLC方法轉換為UPC2方法。這種新的UPC2方法得到的數據與目前的HPLC方法相當,甚至更好,速度是目前的HPLC方法的10倍,并且消耗的溶劑更少。我們以更快的速度得到高品質的分析數據,使實驗室生產率提高,每個樣本的分析成本降低。對于希望將目前的正相HPLC方法轉化為更高效、更省錢方法的實驗室而言,ACQUITY UPC2系統是一種理想的解決方案,同時也增強了健康、安全和環境方面的保護。
 
關于沃特世公司 (www.waters.com)

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