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MEDUSA 96道移液器在磁珠法質粒DNA提取中的應用

瀏覽次數:8515 發布日期:2012-5-22  來源:德淙科儀
MEDUSA 96道移液器在磁珠法質粒DNA提取中的應用
 
MagPure Plasmid Mini Kit 操作流程
準備工作
 ●  96 道移液槍 MEDUSA96
 
 ●  IKA MS3 96 孔振蕩儀
 ●  96 孔深孔盤
 ●  96 孔板磁力架  
 ●  96 孔板離心機 Hettich 320  
 ●  MAGEN MagPure Plasmid Mini Kit 質粒提取試劑盒 
 
操作流程
 
1.  在96孔盤中按標準流程培養1.2ml細菌菌液到合適的濃度。(本實驗中,為驗證本方法對每個樣品的平行性,采用培養250ml菌液,然后用96 道移液槍轉移1ml到每個孔中)
2.  2,000 x g離心 5 分鐘收集細菌,倒棄培養液。
3.  用96 道移液槍轉移170ul Buffer P1/Rnase A至細菌沉淀團中。放置在振蕩儀上,1500-2000rpm振蕩 1-2 分鐘充分重懸細菌。
4.  用 96 道移液槍轉移 170ul Buffer P2 至細菌重懸液中。放置在振蕩儀上,300-600rpm振蕩混勻3 分鐘裂解細菌。
5.  用 96 道移液槍轉移 170ul Buffer N3 至細菌裂解液中。放置在振蕩儀上,300-600rpm振蕩混勻5 分鐘中和。
6.  放到離心機中。4000-4700g離心 15 分鐘沉淀去除雜質。
7.  小心取出96 孔板, 放置在 96 道移液移液槍的平臺中。 調整好移移槍插入的深度, 吸取450ul上清液至新的96 孔反應板中。(若沉淀較多,可只轉移 400ul)
8.  用 96 道移液槍加入 0.5 倍體積的磁珠結合液(Bind Beads)至樣品中。放置在振蕩儀上,1000-1200rpm振蕩混勻1 分鐘。室溫靜置 10 分鐘 (處理低拷貝數的質粒2-8 ℃放置過夜) 。
9.  放置在磁力架上吸附磁珠5 分鐘。用 96 道移液槍吸棄廢液(吸取800ul以上)。
10. 用 96 道移液槍每孔加入600ul 70%乙醇至每一個孔中。放置在振蕩儀上 1000-1200rpm振蕩混勻1 分鐘。
11. 放置在磁力架上吸附磁珠3 分鐘。用 96 道移液槍吸棄廢液(吸取650ul以上)。
12. 用 96 道移液槍每孔加入200ul 70%乙醇。放置在振蕩儀上 1000-1200rpm振蕩混勻1 分鐘。
13. 放置在磁力架上吸附磁珠 3 分鐘。用 96 道移液槍吸棄廢液(吸取250ul以上)。
14. 室溫干燥20 分鐘。
15. 用 96 道移液槍每孔加入50-100ul滅菌水(Elution Buffer),放置在振蕩儀上 1200-2000rpm振蕩混勻2 分鐘。
16. 放置在磁力架上吸附磁珠3 分鐘。用 96 道移液槍轉移質粒溶液至新的 96 孔板中。
 
 
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http://www.biomart.cn/infosupply/4028e4e6342100210134214552dd00b4.htm?tryId=477
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