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ACQUITY UPLC I-Class系統:最小化交叉污染,從而擴展LC/MS/MS定量范圍

瀏覽次數:1884 發布日期:2012-2-8  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負
目的
為證實在進行四個以上數量級進行定量時, LC/MS/MS的樣品殘留量可降低至可測得的水平以下。

背景
現今質譜儀的靈敏度已經能夠實現跨五個數量級的檢測,且柱上進樣量的定量下限可低至阿克級。要使高性能質譜儀的靈敏度不斷增加,也要求LC系統上的樣品交叉污染達到最低,以優化分析性能。

有關驗證跨多個數量級的生物分析方法的規范通常要求最高濃度校準品的樣品殘留量不多于最低濃度校準品的20%。1因此,為使校準范圍跨四個數量級,必須使樣品殘留量低至0.002%以下。

若校準范圍在四個數量級以上,則必須使交叉污染減少至更低的水平。通常,隨著對柱上進樣量交叉污染的要求不斷嚴格,系統污染變得非常關鍵。LC系統及方法必須能夠重復地將分析物自進樣器、管道及色譜柱上去除,以使每次進樣都沒有交叉污染。

奧美拉唑進行分析Xevo® TQ-S上的ACQUITY UPLC® I-Class系可使品殘留量減少至0.0005%以下,且其性定量范跨度可達四個數量以上。
 
解決方案
Xevo TQ-S是具有高靈敏度的用于LC/MS/MS分析的質譜儀。它需要一個能夠解決交叉污染問題的UPLC® 入口,以與該儀器寬泛的線性動態范圍相匹配。ACQUITY UPLC I-Class系統可選用兩種樣品管理器:固定定量環(SM-FL)或流通針式(SM-FTN)進樣器,這兩者在設計上均能實現良好的抗交叉污染性能。在分析奧美拉唑時,采用SM-FTN設計。該種類型的進樣器,在分析過程中,以移動相(梯度)沖洗針頭內部。在進樣口,FTN采用單種溶劑清洗針頭外部,且在設計上能夠實現防止清洗溶液與樣品或流動相接觸。在密封面同時清洗針頭以及密封墊可減少污染幾率。清洗程序已編入本方法中,且可設置為在進樣之前以及進樣之后清洗。清洗溶劑的組成取決于樣品,且其必須能夠很容易地溶解分析物。對于pKa為8.8的奧美拉唑來說,可采用含有氫氧化銨的清洗溶劑來清洗注射器。此外,當將氫氧化銨用于流動相時,系統的交叉污染將更低。在堿性條件下,可使奧美拉唑的離子化效率進一步提高。為評估交叉污染,向色譜柱注射具最高濃度(10 ng/mL或10 pg)的標準品。如圖1所示,在注射最高濃度標準品之后首次進行空白注射時,未觀察到有交叉污染。

基于校準曲線,確定樣品殘留量低于0.0005%,而這低于質譜的檢測下限。如圖2所示,在500 ag至10 pg范圍內,采用1/x權重系數,可獲得相關系數為0.99997的線性,這足以證實可在與Xevo TQ-S連用的ACQUITY UPLC I-Class系統上對奧美拉唑進行線性校準。


小結
ACQUITY UPLC I-Class系統非常適用于需要跨四個以上數量級進行定量的高靈敏度LC/MS/MS方法的交叉污染要求。在對奧美拉唑進行分析時,在Xevo TQ-S上未檢測到樣品殘留,且由此可知,樣品殘留量已減少至0.0005%以下。由于樣品殘留量很少,可在500 fg/mL至10 ng/mL或500 ag至10 pg之間進行校準。

參考文獻
1、
http://www.fda.gov/downloads/Drugs/GuidanceComplianceRegulatoryInformation/Guidances
/ucm070107.pdf
發布者:沃特世科技(上海)有限公司
聯系電話:800(400)8202676 (免費電話支持專線)
E-mail:Jackie_qian@waters.com

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