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DAPI染色液的使用方法及注意事項(xiàng)

瀏覽次數(shù):9711 發(fā)布日期:2012-1-6  來(lái)源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)
DAPI染色液(DAPI Staining Solution)是經(jīng)過(guò)精心優(yōu)化幾乎適用于所有常見(jiàn)細(xì)胞和組織細(xì)胞核染色的染色液。DAPI,即2-(4-Amidinophenyl)-6-indolecarbamidine dihydrochloride,也稱DAPI dihydrochloride,分子式為C16H15N5·2HCl,分子量為350.25,CAS Number 28718-90-3。DAPI是一種可以穿透細(xì)胞膜的藍(lán)色熒光染料。和雙鏈DNA結(jié)合后可以產(chǎn)生比DAPI自身強(qiáng)20多倍的熒光。和EB(ethidium bromide)相比,對(duì)雙鏈DNA的染色靈敏度要高很多倍。DAPI染色常用于細(xì)胞凋亡檢測(cè),染色后用熒光顯微鏡觀察或流式細(xì)胞儀檢測(cè)。DAPI也常用于普通的細(xì)胞核染色以及某些特定情況下的雙鏈DNA染色。DAPI的最大激發(fā)波長(zhǎng)為340nm,最大發(fā)射波長(zhǎng)為488nm;DAPI和雙鏈DNA結(jié)合后最大激發(fā)波長(zhǎng)為364nm,最大發(fā)射波長(zhǎng)為454nm。 DAPI染色液用于固定細(xì)胞或組織的細(xì)胞核染色。
 
保存條件: -20℃避光保存  
 
使用說(shuō)明:
1、對(duì)于細(xì)胞或組織樣品,固定后,適當(dāng)洗滌去除固定劑。隨后如果需要進(jìn)行免疫熒光染色,則先進(jìn)行免疫熒光染色,染色完畢后再按后續(xù)步驟進(jìn)行DAPI染色。如果不需要進(jìn)行其它染色,則直接進(jìn)行后續(xù)的DAPI染色。
2、對(duì)于貼壁細(xì)胞或組織切片,加入少量DAPI染色液,覆蓋住樣品即可。對(duì)于懸浮細(xì)胞,至少加入待染色樣品體積3倍的染色液,混勻。
3、室溫放置3-5分鐘。
4、吸除DAPI染色液,用TBST、PBS或生理鹽水洗滌2-3次,每次3-5分鐘。
5、直接在熒光顯微鏡下觀察或封片后熒光顯微鏡下觀察。細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí),會(huì)看到凋亡細(xì)胞的細(xì)胞核呈致密濃染,或呈碎塊狀致密濃染。
 
注意事項(xiàng):
1、DAPI對(duì)人體有一定刺激性,請(qǐng)注意適當(dāng)防護(hù)。
2、熒光染料都存在淬滅的問(wèn)題,建議染色后盡量當(dāng)天完成檢測(cè)。
3、為減緩熒光淬滅可以使用抗熒光淬滅封片液。
4、為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
發(fā)布者:北京中生瑞泰科技有限公司
聯(lián)系電話:010-63250233
E-mail:ruitaibio2010@163.com

標(biāo)簽: DAPI 核酸染色
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