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大鼠Caspase-3(Caspase-3)ELISA試劑盒使用說明書

瀏覽次數:2201 發布日期:2011-6-28  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負
上海西唐生物科技有限公司  021-55229872,  65333639  www.westang.com 
大鼠Caspase-3(Caspase-3)ELISA試劑盒使用說明書
 (用于血清、血漿、細胞培養上清液和其它生物體液內)
 
原理
本實驗采用雙抗體夾心 ABC-ELISA法。用抗大鼠 Caspase-3 單抗包被于酶標板上,標準品和樣品中的 Caspase-3與單抗結合,加入生物素化的抗大鼠Caspase-3,形成免疫復合物連接在板上,辣根過氧化物酶標記的Streptavidin與生物素結合,加入底物工作液顯藍色,最后加終止液硫酸,在450nm處測OD值,Caspase-3濃度與OD值成正比,可通過繪制標準曲線求出標本中Caspase-3濃度。
試劑盒組成2-8℃保存)
酶標板(Coated Wells)
96孔
酶標抗體工作液(Enzyme Conjugate)
12ml
10×標本稀釋液(Sample Buffer)
12ml
20×濃縮洗滌液(Wash Buffer)
50ml
標準品(Standards):20μM/瓶
2瓶
底物工作液(TMB Solution)
12ml
第一抗體工作液(Biotinylated Antibody)
12ml
終止液(Stop Solution)
12ml
準備試劑與收集血樣
1.          收集標本:血清、血漿(EDTA、檸檬酸鹽、肝素抗凝)、細胞培養上清液、組織勻漿等盡早檢測,2-8℃保存48小時;更長時間須冷凍(-20 ℃或-70 ℃)保存,避免反復凍融。血清、血漿至少作12稀釋(取50ul,加標本稀釋液50ul,稀釋2倍)。細胞上清至少10倍稀釋。
2.          標準品液配制:使用前加入1ml蒸餾水混勻,配成20mM的溶液。設標準管8管,第一管加標本稀釋液900ul,第二至第八管加入標本稀釋液500ul。在第一管中加入20mM的標準品溶液100ul混勻后用加樣器吸出500ul,移至第二管。如此反復作對倍稀釋,從第七管中吸出500ul棄去。第八管為空白對照。
3.          10×標本稀釋液用蒸餾水作1:10倍稀釋(示例:1ml濃稀釋液+9ml蒸餾水)。
4.         洗滌液:用重蒸水1:20稀釋(示例:1ml濃縮洗滌液加入19ml的重蒸水)
檢測程序
1.          加樣:每孔各加入標準品或待測樣品100ul,將反應板充分混勻后置37℃120分鐘。
2.          洗板:用洗滌液將反應板充分洗滌4-6次,向濾紙上印干。
3.          每孔中加入第一抗體工作液100ul。將反應板充分混勻后置37℃60分鐘。
4.          洗板:同前。
5.          每孔加酶標抗體工作液100ul。將反應板置37℃30分鐘。
6.          洗板:同前。
7.          每孔加入底物工作液100ul,置37 ℃暗處反應15分鐘。
8.          每孔加入100ul終止液混勻。
9.          30分鐘內用酶標儀在450nm處測吸光值。
結果計算與判斷
1.          所有OD值都應減除空白值后再行計算。
2.          以標準品2000、1000、500、250、125、62.5、31.2、0 μM為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上作圖,畫出標準曲線。
3.          根據樣品OD值在該曲線圖上查出相應Caspase-3含量。
試劑盒性能
             1.   靈敏度:最小的Caspase-3 檢測濃度小于15μM。
2.        特異性:可同時檢測重組或天然的大鼠Caspase-3。不與大鼠其它細胞因子有交叉反應。
3.        重復性:板內、板見變異系數均小于10%。
注意事項
             1.   以上標準孔及待測樣品均建議做復孔,每次測定應同時做標準曲線。
 2.   洗滌過程很關鍵。洗滌不充分將導致精確度誤差及OD值錯誤地升高。
             3.   板條開封后剩余板條要再封好,保持板條干燥
             4.   本試劑盒宜置4oC冰箱保存。
 5.   本試劑盒僅用于科研,不能用于臨床診斷!
發布者:上海西唐生物科技有限公司
聯系電話:021-65333639 55229872 55229873
E-mail:westang@163.com

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