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大鼠8異前列腺素F2(8-iso PGF2)ELISA試劑盒使用說明書

瀏覽次數(shù):1602 發(fā)布日期:2011-5-20  來源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)
大鼠8異前列腺素F2a(8-iso PGF2a)ELISA試劑盒使用說明書
 (用于血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清液和其它生物體液內(nèi))
 
原理
本實驗采用雙抗體夾心 ABC-ELISA法。用抗大鼠 8-iso PGF2a 單抗包被于酶標(biāo)板上,標(biāo)準(zhǔn)品和樣品中的 8-iso PGF2a與單抗結(jié)合,加入生物素化的抗大鼠8-iso PGF2a,形成免疫復(fù)合物連接在板上,辣根過氧化物酶標(biāo)記的Streptavidin與生物素結(jié)合,加入底物工作液顯藍(lán)色,最后加終止液硫酸,在450nm處測OD值,8-iso PGF2a濃度與OD值成正比,可通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線求出標(biāo)本中8-iso PGF2a濃度。
試劑盒組成2-8℃保存)
酶標(biāo)板(Coated Wells)
96孔
酶標(biāo)抗體工作液(Enzyme Conjugate)
12ml
10×標(biāo)本稀釋液(Sample Buffer)
12ml
20×濃縮洗滌液(Wash Buffer)
50ml
標(biāo)準(zhǔn)品(Standards):400ng/瓶
2瓶
底物工作液(TMB Solution)
12ml
第一抗體工作液(Biotinylated Antibody)
12ml
終止液(Stop Solution)
12ml
準(zhǔn)備試劑與收集血樣
1.   收集標(biāo)本:血清、血漿(EDTA、檸檬酸鹽、肝素抗凝)、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測,2-8℃保存48小時;更長時間須冷凍(-20 ℃或-70 ℃)保存,避免反復(fù)凍融。所有標(biāo)本測定前用標(biāo)本稀釋液作120稀釋(取10ul,加標(biāo)本稀釋液190ul,稀釋20倍)。
2.   標(biāo)準(zhǔn)品液配制:使用前加入0.5ml蒸餾水混勻,配成800ng/ml的溶液。設(shè)標(biāo)準(zhǔn)管8管,每管加入標(biāo)本稀釋液300ul。在第一管中加入800ng/ml的標(biāo)準(zhǔn)品溶液300ul混勻后用加樣器吸出300ul,移至第二管。如此反復(fù)作對倍稀釋,從第七管中吸出300ul棄去。第八管為空白對照。
3.   10×標(biāo)本稀釋液用蒸餾水作1:10倍稀釋(示例:1ml濃稀釋液+9ml蒸餾水)。
4.    洗滌液:用重蒸水1:20稀釋(示例:1ml濃縮洗滌液加入19ml的重蒸水)
檢測程序
1.    加樣:每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100ul,將反應(yīng)板充分混勻后置37℃120分鐘。
2.   洗板:用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4-6次,向濾紙上印干。
3.   每孔中加入第一抗體工作液100ul。將反應(yīng)板充分混勻后置37℃60分鐘。
4.   洗板:同前。
5.   每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul。將反應(yīng)板置37℃30分鐘。
6.   洗板:同前。
7.   每孔加入底物工作液100ul,置37 ℃暗處反應(yīng)15分鐘。
8.   每孔加入100ul終止液混勻。
9.   30分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在450nm處測吸光值。
結(jié)果計算與判斷
1.    所有OD值都應(yīng)減除空白值后再行計算。
2.    以標(biāo)準(zhǔn)品400、200、100、50、25、12.5、6.25、0 ng/ml為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上作圖,畫出標(biāo)準(zhǔn)曲線。
3.    根據(jù)樣品OD值在該曲線圖上查出相應(yīng)8-iso PGF2a含量,再乘上稀釋倍數(shù)即可。
試劑盒性能
1.   靈敏度:最小的8-iso PGF2a 檢測濃度小于3ng/ml。
2.   特異性:可同時檢測重組或天然的大鼠8-iso PGF2a。不與大鼠其它細(xì)胞因子有交叉反應(yīng)。
3.   重復(fù)性:板內(nèi)、板見變異系數(shù)均小于8.6%。
注意事項
1.   以上標(biāo)準(zhǔn)孔及待測樣品均建議做復(fù)孔,每次測定應(yīng)同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線。
2.   洗滌過程很關(guān)鍵。洗滌不充分將導(dǎo)致精確度誤差及OD值錯誤地升高。
3.   板條開封后剩余板條要再封好,保持板條干燥。
4.   本試劑盒宜置4oC冰箱保存。
5.   本試劑盒僅用于科研,不能用于臨床診斷!
 
發(fā)布者:上海西唐生物科技有限公司
聯(lián)系電話:021-65333639 55229872 55229873
E-mail:westang@163.com

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