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FITC標記抗體-Chadwick氏法

瀏覽次數:1728 發布日期:2010-10-13  來源:www.pricells.com.cn
FITC標記抗體-Chadwick氏法
        
試劑:
抗體球蛋白溶液、異硫氰酸熒光素、3%重碳酸鈉水溶液、pH8.0的0.01mol/L PBS、1%硫柳汞;
 
材料:
離心機及離心管、三角燒瓶(25ml)、冰槽、無菌吸管及毛細滴管、透析袋、玻璃棒、棉線及燒杯(500ml)等;
 
方法與步驟:
1.       抗體的準備。用0—4℃ pH8.0的PBS將免疫球蛋白溶液濃度稀釋為30—40mg/ml,置于三角燒瓶內,放入冰槽中;
2.       熒光素的準備。按每毫克免疫球蛋白加0.01mg熒光素計算,稱取所需的熒光素量,用3%重碳酸鈉水溶液溶解;
3.       將上述已準備好的抗體與熒光色素溶液等量混合,充分攪拌,使其在0—4℃冰箱中結合18—24h;
4.       透析。熒光素與球蛋白結合完畢后,將球蛋白的溶液以2500r/min離心20min,除去其中少量的沉淀物后,裝入透析袋中再置于燒杯中,在0—4℃下用pH8.0的緩沖鹽溶液透析過夜;
5.       過柱。取透析過夜的標記物,過葡萄糖凝膠G-25或G-50柱,分離出游離熒光素,收集標記的熒光抗體進行鑒定;
發布者:武漢原生原代生物醫藥科技有限公司
聯系電話:027-87490190
E-mail:service@pricells.com.cn

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