用密度梯度離心分離亞細(xì)胞構(gòu)造往往需要預(yù)先制備蔗糖或其他合適梯度材料的密度梯度，操作比較復(fù)雜。利用新型的梯度材料Nycodenz (Norway，Nycomed pharma AS公司)用凍融法制備凸指數(shù)與凹指數(shù)共存的曲線(xiàn)梯度，利用超速離心機(jī)的水平轉(zhuǎn)頭可以簡(jiǎn)便地分離出亞細(xì)胞構(gòu)造中線(xiàn)粒體，高爾基復(fù)合體，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)（滑面及糙面），溶酶體及過(guò)氧化酶體。離心分部收集后分別做SDS—PAGE電泳可以明顯地看出細(xì)胞器的分布情況。
設(shè)備：超速離心機(jī)（日立CP—MX,CP—WX或其他品牌新型機(jī)）
轉(zhuǎn)頭：R28S 甩平轉(zhuǎn)頭
離心管：40PA
密度梯度儀：日立DGF—U用于自上而下從離心管抽出分離液至分部收集器
分部收集器、密度測(cè)定設(shè)備、電泳儀等常規(guī)設(shè)備。
樣品：鼠肝勻漿，每管加3.5ml （濃度—14mg/ml ）
步驟：
1．Nycodenz梯度制備：
   每管用Nycodenz 稀釋配置液20％ w/v (1.105g/ml) 32ml 放入－20℃冰箱凍結(jié)。全部?jī)鼋Y(jié)后取出室溫中融化即成為（從液面到管底）密度從1.04g/ml 到 1.27/ml 的曲線(xiàn)型      （從 1.05g/ml 到1.13g/ml 為凸指數(shù)型，從 1.13g/ml 到1.27g/ml 為凹指數(shù)曲線(xiàn)）連續(xù)梯度。
2．加樣：在連續(xù)梯度上鋪樣品至距管口3mm（約3.5ml）
3．離心：日立R28S甩平轉(zhuǎn)頭，6×40ml 鈦合金吊桶，40PA管，25,000rpm (82,200xg)，4℃離心3小時(shí)，加速“8”，減速“7”
4．收集：離心后每管分別用日立DGF—U上取法自動(dòng)收集至分部收集器也可以人工收集（自上而下），收集管每管約0.5—0.75ml （即40PA 離心管收集成52—78管）
5．測(cè)密度：測(cè)定每管的密度值，按管數(shù)→密度繪成曲線(xiàn)
6．電泳：每管取3 ul 做SDS—PAGE 電泳，并標(biāo)定管數(shù)對(duì)應(yīng)密度及分子量的重疊曲線(xiàn)。
7．分析：根據(jù)密度分布可以繪出高爾體復(fù)合體，滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，糙面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)線(xiàn)粒體，溶酶體及氧化酶微體（注意內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和微體由于他們的密度及大小不同，可能都會(huì)有二個(gè)區(qū)域的分布）的分布區(qū)域，由于它們?cè)贜ycodenz 中浮密度的重疊，分布的區(qū)域也會(huì)有所重疊。

參考文獻(xiàn)：
1．K．Murayama 等  “Electrophoresis”  2001，Vol：22   PP  2872—2880
2．Hitachi KoKi，Scientific Inst.Division，“himac Application” NO：110，2003.1