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細胞培養過程中,臺盼藍染色和AOPI染色分析細胞活率的正確操作方式

瀏覽次數:1356 發布日期:2024-12-24  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負
在細胞培養過程中,了解細胞的活率對于評估細胞健康狀態、優化培養條件以及進行藥物篩選等實驗至關重要。細胞活率的分析方法主要包括鏡檢法(如血球計數板)、圖像分析法、電阻抗法、流式細胞術等,它們各自具有獨特的優勢和局限性。最常用的方法是圖像分析法,圖像分析法可以自動拍照和數據分析統計,適應性強,適用于幾乎所有類型細胞的檢測,圖像分析中區別細胞死活的方式主要為臺盼藍染色和AOPI染色。

染色原理:臺盼藍染色和AOPI染色
臺盼藍染色原理:正常的活細胞,胞膜結構完整,能夠排斥臺盼藍,使之不能夠進入胞內;而喪失活性或細胞膜不完整的細胞,胞膜的通透性增加,可被臺盼藍染成藍色,通常認為細胞膜完整性喪失,即可認為細胞已經死亡。因此,被染色的細胞為死細胞,沒有被染色的為活細胞。

 
AOPI染色原理:AOPI試劑由AO(Acridine Orange,吖啶橙)和PI(Propidium iodide,碘化丙啶)組成。其中,AO是一種異染性熒光陽離子染料,可滲透細胞膜,并嵌入所有細胞(活細胞和死細胞)的細胞核,檢測到綠色熒光。PI不能通過完整的細胞膜,只能進入死細胞的細胞膜,并嵌入死細胞的細胞核,檢測到紅色熒光。當AO、PI試劑均存在于細胞中,在合適的染料配比下,染料間會發生熒光共振能量轉移,致活細胞被激發出綠色熒光,死細胞被激發出紅色熒光。


影響因素:結果依賴于實驗操作規范
AOPI染色和臺盼藍染色作為細胞實驗中評估細胞活力和數量的關鍵方法,在傳統的圖像分析法中,其結果是否準確高度依賴于實驗人員是否嚴格遵守操作規范。在AOPI中,染色工作液的配制、細胞樣本的處理及檢測時的操作細節,任何一環的人為疏忽都可能影響細胞染色效果和最終的分析結果。同樣,在臺盼藍染色過程中,細胞懸液的制備、染料的配制與染色時間以及細胞計數的準確性,均受到人為因素的影響,進而影響細胞活力的評估。

另外,臺盼藍染料具有一定毒性,操作時需嚴格佩戴手套和口罩,做好防護措施,避免接觸皮膚和吸入氣體‌,對健康產生不利影響。

自動化解決方案:消除人為操作風險
細胞樣品制備實現自動染色和混勻:浚真生命科學自主研發的微流控芯片,將臺盼藍/AOPI染料試劑包埋于微米級的系統結構中,細胞樣品從微流控芯片進樣口進入后,將在流向芯片檢測區的過程中實現自動染色和混勻,不再需要人為進行樣品染色及混勻制備,消除人為操作風險,不僅為實驗人員減輕工作量,避免雜質干擾,還為檢測結果的準確性和精確性提供有力保障。

光學系統:雙熒光+明場適應各種染色方式
雙熒光+明場集成光學系統:浚真生命科學研發的CytScop®系列智能細胞計數儀搭載“雙熒光+明場”的寬場大視野光學系統,結合高分辨率物鏡及自動對焦計數,在捕獲更多細胞樣本的同時,保持高對比度及清晰度,可實現自動調整焦距和曝光度,無需人為干預,在明場下有良好的細胞形態細節表現能力,暗場中能夠收集更多熒光信號,識別細胞更準確。“雙熒光+明場”集成式光學系統設計,方便用戶根據實驗需求自如選擇細胞染色方法,輕松獲取準確的分析數據。


CytScop®的AI模型能夠更科學地識別細胞凋亡/團簇團聚等復雜情況;模型運行時,不再需要人為設置各種參數閾值如直徑、亮度、圓度、系數等,對不同的細胞類型/生物工藝具有良好的可拓展性與更準確的泛化能力,使得分析結果更加準確。
 
發布者:上海浚真生命科學有限公司
聯系電話:021-57678995
E-mail:yuan.yue@bioaces.com

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