NCI-H1299、RAW 264.7、293T-ACE2等細(xì)胞的完全培養(yǎng)基配置與傳代步驟
美森產(chǎn)品頻登各大期刊
近年，隨著美森細(xì)胞的產(chǎn)品種類越來越豐富，產(chǎn)品質(zhì)量也是頻頻收獲業(yè)內(nèi)人士的稱贊，許多學(xué)者都會采購美森的產(chǎn)品進(jìn)行實(shí)驗(yàn)后，在各大期刊上發(fā)表論文，均取得了不錯(cuò)的成績，美森深感榮幸。
讓我們一起看看是哪些產(chǎn)品收獲了學(xué)者們的芳心~
01 NCI-H1299
原文鏈接：
https://biologicalproceduresonline.biomedcentral.com/articles/10.1186/s12575-023-00192-4
細(xì)胞展示
完全培養(yǎng)基配制
該細(xì)胞系培養(yǎng)所用基本培養(yǎng)基為RPMI1640 Medium,配置完全培養(yǎng)基時(shí)需加入10%FBS，1% Anti-Anti。
傳代步驟
1. 吸取并棄掉培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)基, 加入PBS清洗一次。
2. 加入1.0 mL 0.25（w/v）Trypsin-0.53mM EDTA溶液，并置于37℃培養(yǎng)箱中孵育，直至細(xì)胞從壁上脫落分離。此過程大約需要3至5分鐘（此處為12.5 cm²培養(yǎng)瓶所用體積，可根據(jù)實(shí)際情況增減用量）。
3. 加入2mL完全培養(yǎng)基中和胰蛋白酶，并輕輕吹打?qū)⒓?xì)胞從培養(yǎng)瓶表面吹落，并使細(xì)胞分散。
4. 離心200xg/5 min，去除上清后，取適量的培養(yǎng)基將細(xì)胞重懸,取適量懸液置于新的培養(yǎng)瓶中，并加入新鮮細(xì)胞完全培養(yǎng)基至總體積為4mL。
5. 將細(xì)胞置于含有5%CO2的37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
傳代比例：建議 1:2 至 1:4（以培養(yǎng)瓶底面積計(jì)算）
培養(yǎng)基換液: 每隔 2 至 3 天。
02 RAW 264.7
原文鏈接：
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC7917392/
細(xì)胞展示
完全培養(yǎng)基配制
傳代步驟
2. 用細(xì)胞刮鏟使細(xì)胞從培養(yǎng)板底部脫落。
3. 吹打使細(xì)胞分散，然后轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)板中。
傳代比例：建議 1:3至 1:4（以培養(yǎng)瓶底面積計(jì)算）。
培養(yǎng)基換液: 每隔2至 3天。
03 293T-ACE2
原文鏈接：
https://www.nature.com/articles/s41421-022-00517-9
細(xì)胞展示
完全培養(yǎng)基配制
2. 加入1.0 mL 0.25（w/v）Trypsin-0.53mM EDTA溶液，并置于37℃培養(yǎng)箱中孵育，直至細(xì)胞從壁上脫落分離。此過程大約需要3至5分鐘（此處為12.5 cm²培養(yǎng)瓶所用體積，可根據(jù)實(shí)際情況增減用量）。
3. 加入2mL完全培養(yǎng)基中和胰蛋白酶，并輕輕吹打?qū)⒓?xì)胞從培養(yǎng)瓶表面吹落，并使細(xì)胞分散。
4. 離心200xg/5 min，去除上清后，取適量的培養(yǎng)基將細(xì)胞重懸,取適量懸液置于新的培養(yǎng)瓶中，并加入新鮮細(xì)胞完全培養(yǎng)基至總體積為4mL。
5. 將細(xì)胞置于含有5%CO2的37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
傳代比例：建議 1:2 至 1:4（以培養(yǎng)瓶底面積計(jì)算）
培養(yǎng)基換液: 每隔 2 至 3 天。
注意：該細(xì)胞插入人源ACE2基因，且具有Puro抗性。
原文鏈接：
https://www.frontiersin.org/articles/10.3389/fgene.2022.817552/full
細(xì)胞展示
完全培養(yǎng)基配制
注意：請勿過濾完全培養(yǎng)基。
2. 加入1.0 mL 0.25（w/v）Trypsin-0.53mM EDTA溶液，并置于37℃培養(yǎng)箱中孵育，直至細(xì)胞從壁上脫落分離。此過程大約需要3至5分鐘（此處為12.5 cm²培養(yǎng)瓶所用體積，可根據(jù)實(shí)際情況增減用量）。
3. 加入2mL完全培養(yǎng)基中和胰蛋白酶，并輕輕吹打?qū)⒓?xì)胞從培養(yǎng)瓶表面吹落，并使細(xì)胞分散。
4. 離心200xg/5 min，去除上清后，取適量的培養(yǎng)基將細(xì)胞重懸,取適量懸液置于新的培養(yǎng)瓶中，并加入新鮮細(xì)胞完全培養(yǎng)基至總體積為4mL。
5. 將細(xì)胞置于含有5%CO2的37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
傳代比例：建議 1:2 至 1:4（以培養(yǎng)瓶底面積計(jì)算）
培養(yǎng)基換液: 每隔 2 至 3 天。
注意：培養(yǎng)板需預(yù)先進(jìn)行包被24小時(shí)（包被液組分為 ：0.01mg/ml fibronectin, 0.03 mg/ml bovine collagen type I and 0.01 mg/ml bovine serum albumin dissolved in culture medium.
原文鏈接：
https://www.karger.com/Article/FullText/525563
細(xì)胞展示
完全培養(yǎng)基配制
該細(xì)胞系培養(yǎng)所用基本培養(yǎng)基為DMEM/F12 Medium，配置完全培養(yǎng)基時(shí)需加入10%FBS，1% Anti-Anti。
傳代步驟
1. 吸取并棄掉培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)基, 加入PBS清洗一次。
2. 加入1.0 mL 0.25（w/v）Trypsin-0.53mM EDTA溶液，并置于37℃培養(yǎng)箱中孵育，直至細(xì)胞從壁上脫落分離。此過程大約需要3至5分鐘（此處為12.5 cm²培養(yǎng)瓶所用體積，可根據(jù)實(shí)際情況增減用量）。
3. 加入2mL完全培養(yǎng)基中和胰蛋白酶，并輕輕吹打?qū)⒓?xì)胞從培養(yǎng)瓶表面吹落，并使細(xì)胞分散。
4. 離心200xg/5 min，去除上清后，取適量的培養(yǎng)基將細(xì)胞重懸,取適量懸液置于新的培養(yǎng)瓶中，并加入新鮮細(xì)胞完全培養(yǎng)基至總體積為4mL。
5. 將細(xì)胞置于含有5%CO2的37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
傳代比例：建議 1:2 至 1:4（以培養(yǎng)瓶底面積計(jì)算）
培養(yǎng)基換液: 每隔 2 至 3 天。
