科研實驗中我們經(jīng)常需要配制各種濃度的試劑。例如細胞實驗一般需要加入小分子激動劑/抑制劑；分子轉(zhuǎn)化實驗一般會加入抗生素；免疫實驗需要加入免疫刺激物/免疫佐劑等。這些昂貴的試劑濃度一旦計算錯誤，不僅挑燈夜戰(zhàn)得來的數(shù)據(jù)毀于一旦，早日發(fā)文的愿望也隨之破滅，可謂一失足成千古恨。今天小愛就為大家解決這一難題，讓我們學會快速換算試劑濃度，擺脫科研失誤。
 

案例一    抑制劑儲存液配制

我們買來的小分子抑制劑一般是凍干粉，需要把它配制成溶液。首先，我們應該知道藥物的分子量、溶解度以及規(guī)格。如果是毫克級小包裝，一般不需要稱量分裝，直接在原瓶中溶解配成儲存液。
 

以ROCK抑制劑Y-27632為例, 該藥物推薦溶劑DMSO，同時，最大只能配成129.38mM的儲存液。這一點非常重要。有些人沒有注意藥物溶解性，直接在非水溶性藥物中加入PBS配置，結果藥物不溶，“損失慘重”。

假如我們需要配置10mM儲存液，計算公式如下：
 

   質(zhì)量（mg）= 濃度（mM）x 體積（L）x 分子量  （1）
5（mg）= 10（mM）x ?（L）x 247.34

即向含5mg Y-27632的原瓶中加入2.02mL DMSO，即可配制成10mM溶液。（注：此處要預估原瓶的容量，如果原瓶容量小于2 mL，應考慮配置更大濃度的儲存液，如20mM，加入1.01 mL DMSO）。
 

此外，我們也會經(jīng)常遇到質(zhì)量濃度和摩爾濃度單位轉(zhuǎn)換，同樣以10mM Y-27632為例：

10mM=10mmol/L，化合物分子量為247.34，即247.34g/mol=247.34mg/mmol
10mmol/L x 247.34mg/mmol = 2473.4mg/L= 2.4734mg/mL
即10mM Y-27632溶液相當于2.4734mg/mL

濃度快速換算法則：
1）mM轉(zhuǎn)換mg/mL，摩爾濃度數(shù)值乘以分子量再除以1000；
2）mg/mL轉(zhuǎn)換mM，質(zhì)量濃度數(shù)值除以分子量再乘以1000。
 

案例二     抑制劑儲存液稀釋

我們買來抑制劑的凍干粉，配制儲存液的濃度為10mM，如果需要使用終濃度為25uM進行細胞實驗，需要加入多少抑制劑儲存液呢？記住下面這個稀釋公式就可以了：
 

起始濃度 x 起始體積 = 最終濃度 x 最終體積
   C1（mM） x V1（mL）= C2（mM）x V2（mL） （2）
首先，注意單位，我們假設最終體積為2mL，代入公式：
10（mM）x V1（mL）= 0.025（mM）x 2（mL）
即我們需要吸取5uL的儲存液進行實驗操作。
 

案例三    百分比濃度換算

我們在使用二硫蘇糖醇(DTT)做實驗時，會遇到這樣的問題：已發(fā)表的文獻中使用0.1%的DTT溶液，而你購買的DTT為1mol/L的儲存液，那么這該如何換算呢？請聽小愛為您解答：
 

DTT的分子量為154，即154g/mol，儲存液換算成質(zhì)量濃度C1為
154g/mol x 1mol/L = 154g/L

假設需配制1L的0.1%DTT溶液，即V2 = 1L = 1000mL
0.1% DTT溶液為0.1g/100mL = 1g/1000mL = 1g/L，即C2 = 1g/L

再使用公式（2）C1 x V1 = C2 x V2 可得：
154（g/L）x V1（L）= 1（g/L）x 1（L）

V1 = 6.5mL，即吸取6.5mL 1mol/L的DTT儲存液，加入993.5mL稀釋液中即可獲得0.1%的DTT溶液。
 

如果我們購買的是固體二硫蘇糖醇，配制0.1%的DTT溶液方法如下：精確稱取1g二硫蘇糖醇，用水定容至1000mL即可。

DL-二硫蘇糖醇科普

DL-二硫蘇糖醇(DL-Dithiothreitol，DTT)具有很強的還原性，其還原性很大程度上是由于其氧化狀態(tài)六元環(huán)（含二硫鍵）的構象穩(wěn)定性。DTT有抗氧化作用，它能保護酶分子上的還原性基團，維持還原性環(huán)境，穩(wěn)定酶的活性。DTT中還含有一定RNA酶抑制劑，具有抑制RNA酶活性的作用。具有巰基乙醇相似的作用，但DTT的刺激性氣味要小很多，毒性也比巰基乙醇低很多。用作蛋白質(zhì)巰基保護劑和蛋白質(zhì)二硫鍵的裂解和順序分析。

DL-二硫蘇糖醇應用：

※ 作為牛奶中主要過敏原αs1-酪蛋白的還原和烷基化反應物之一；

※ 作為精子去膜和再激活培養(yǎng)基的一個組分；

※ 因硫醇可有效保護生物催化劑的活性位點而維持酶的穩(wěn)定性；

※ 作為還原劑用于測試N-乙基馬來酰亞胺與巰基反應的特異性。