人臍靜脈內(nèi)皮細胞HUVEC培養(yǎng)過程中出現(xiàn)的問題及解決方法
人臍靜脈內(nèi)皮細胞（Human Umbilical Vein Endothelial Cells，HUVEC）是臍靜脈的重要構成細胞之一。當進行血管內(nèi)皮細胞實驗時，通常使用人臍靜脈內(nèi)皮細胞，而非靜脈內(nèi)皮細胞或動脈內(nèi)皮細胞。永生化的HUVEC會通過慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶RFP基因或GFP基因。
表1 HUVEC細胞基本信息
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名稱 |
HUVEC（人臍靜脈內(nèi)皮細胞） |
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形態(tài) |
上皮樣 |
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生長特性 |
貼壁 |
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接種密度 |
8.0 x 103-3.0 x 104 viable cells/cm2 |
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傳代比率 |
1:2-1:3 |
圖1 HUVEC（人臍靜脈內(nèi)皮細胞）
首先要討論的是HUVEC的“嘴巴刁不刁”？
通常來說，HUVEC的“胃口”還是蠻“刁”的，營養(yǎng)需求很高，除了營養(yǎng)種類豐富的F12和必不可少的胎牛血清（如表2所示），肝素和血管內(nèi)皮生長因子也是必須的。如圖2所示，長勢良好的HUVEC呈鵝卵石樣，輪廓清晰，鋪展均勻，一般2-3天可傳代。
表2 為HUVEC精心準備的“食譜”
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營養(yǎng) |
含量 |
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F12 |
90% |
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胎牛血清 |
10% |
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肝素 |
終濃度0.1mg/ml |
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ECGS血管內(nèi)皮生長因子 |
0.03-0.05ug/ml |
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雙抗 |
1% |
圖2 長勢良好的HUVEC（人臍靜脈內(nèi)皮細胞）
其次要討論一下為啥頭天換液，第二天HUVEC無限細胞系突然出現(xiàn)空泡化？
如圖3所示，嚴重空空泡化的HUVEC。這里要注意的是有限細胞系的空泡化往往是細胞凋亡的顯著特征，與細胞本身狀態(tài)有關。而無限細胞系空泡化通常與外界因素有管，有以下兩種可能： 第一點是培養(yǎng)液的pH值與細胞正常所需pH值差別太大，導致細胞代謝異常，出現(xiàn)空泡化；第二點是在細胞培養(yǎng)過程中，由于血清濃度不夠、藥物作用、外界刺激等情況下導致細胞代謝出現(xiàn)問題，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激狀況下會出現(xiàn)細胞空泡化的情況。
圖3 空泡化的HUVEC（人臍靜脈內(nèi)皮細胞）
解決細胞空泡化，通常有兩種方法：
1. 測定完培的pH，看其酸堿性是否適宜。多數(shù)細胞適宜的pH范圍為7.2-7.4。
2. 若培基或血清是開封存放很久的，可換用新鮮的完配給細胞換液；若都是新開封的，可換用新批次的基培或血配制培養(yǎng)液，給細胞換液觀察。
最后要討論的是如何解決HUVEC聚團問題，培養(yǎng)瓶尤其是培養(yǎng)板的親水性較差時或血清中的促貼壁因子不足時，會導致HUVEC細胞聚團問題。
解決辦法：培養(yǎng)瓶前一天用明膠（abs47051214)包被可有效預防HUVEC聚團。包被方法：以 T25 培養(yǎng)瓶為例，取5ml的明膠，加入培養(yǎng)瓶， 放置37℃條件下至少30分鐘，然后用槍頭將液體吸出即可。如圖示4所示，是鋪展均勻的HUVEC（人臍靜脈內(nèi)皮細胞）。
圖4 正常貼壁，伸展均勻的HUVEC（人臍靜脈內(nèi)皮細胞）
