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蠟樣芽孢桿菌核酸檢測試劑盒(恒溫熒光法)使用說明書

瀏覽次數:4270 發布日期:2018-7-1  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負

  蠟樣芽孢桿菌核酸檢測試劑盒(恒溫熒光法)

◆ 產品說明

致病菌檢測系列基于獨特的恒溫熒光檢測技術,可針對食品、飼料等樣品中的致病微生物的特異核酸片段進行擴增,儀器實時監測擴增過程中的熒光信號變化,自動判讀結果。本產品用于蠟樣芽孢桿菌的檢測。檢出限為103 CFU/ml 

◆ 產品組成(48測試)

011141M

試劑

含量

A-Bac-I

1200μL × 1支

B-I

  55μL × 1支

C-I

1200μL × 1支

NG-I

  50μL × 2支

PG-Bac-I

  50μL × 1支

◆ 適用儀器

   Dhelix 1610、Dhelix 3210、ESE Tube Scanner、Genie II、Deaou-308c等恒溫熒光檢測儀, ABI 7500,LightCycler480,CFX 96等熒光PCR儀。

◆ 自備耗材和儀器

①滅菌1.5mL或2.0mL離心管;②滅菌0.2mL PCR管或八聯管;③冰盒;④移液器(0.5-10μL,10-100μL,100-1000μL)及配套滅菌吸頭;⑤離心機;⑥渦旋混勻器;⑦金屬浴

◆ 注意事項

1.本試劑檢測靈敏度高。為了防止污染,實驗要分區操作。

   1)第一區:試劑準備區。

   2)第二區:樣本制備區。

 3)第三區:模板添加區。

   4)第四區:擴增及產物分析區。

   ★ 分區之間最好進行物理性隔離,避免人為因素造成的污染。

2.實驗過程中穿戴工作服和乳膠手套,不同區域獨立使用工具,需更換手套和實驗服。

3.嚴格按照操作步驟操作,試劑配制和加樣等步驟請嚴格按照說明書要求在冰盒上操作。

4.反應液中的成分對光敏感,應避光保存。試劑使用前要完全解凍,但應避免反復凍融,推薦使用前離心30秒,并按檢測頻次將反應液以適當體積分管保存。

5.反應結束后,擴增管請置于密封袋內丟棄,當日清理,開蓋易造成氣溶膠污染,禁止開蓋。

6.不同批號試劑請勿混合使用,在有效期內使用。

7. 檢出限為103 CFU/ml是以1 ml 103 CFU/ml增菌液離心后收集菌體再提取的細菌基因組DNA作為模板。

◆ 樣品處理

參照《SN/T 3932-2014》中的3.4.1處理樣品,對樣品進行前增菌,制備的菌液保存待用。

冷凍樣品應在45 ℃以下不超過15 min或在2 ℃~5 ℃不超過18 h解凍,若不能及時檢驗,應放于-18℃左右保存;非冷凍而易腐的樣品應盡可能及時檢驗,若不能及時檢驗,應置于2 ℃~5 ℃冰箱保存,24 h內檢驗。

稱取樣品25 g,放入盛有225 mL LB培養基中進行均質,均質取2~3個適宜稀釋度的樣品勻液30 ℃±1 ℃培養9 h~18 h。

詳細步驟請按照標準操作或查閱食安通軟件。

◆ 實驗操作

將試劑完全解凍,各組分離心30s。

1. 試劑配制(試劑準備區,放置于冰盒中進行):

若有N個待檢樣品,則參照下表,按照N+2個數量計算各組分用量(N個待檢樣品+1個陰性對照+1個陽性對照),將反應液置于0.6ml或者1.5ml離心管中,渦旋混勻,離心30秒,分裝于0.2ml PCR管中,并向每管加入1滴C-I(約20μl)。

試劑

使用量

A-Bac-I

22×(N+2)μL

B-I

 1×(N+2)μL

反應液總體積

23×(N+2)μL

  1. 模板制備(樣本制備區)

建議使用試劑配套細菌組DNA提取系列產品,具體過程詳見產品說明書。

3.添加模板(模板添加區,放置于冰盒中進行)

       在步驟1中已含有反應液的PCR管中加入2μL模板,順序為NG-I、待測樣品模板、PG-Bac-I。渦旋混勻30s,離心1min,立即進行擴增反應。

4. 擴增反應(擴增及產物分析區)

①恒溫儀器63℃條件下反應45min。

      ②若使用熒光定量PCR儀,則熒光基團選擇FAM,淬滅基團選擇None,將63℃ 15 s,63℃ 45 s作為一個循環,于63℃ 45 s處收集熒光信號,45個循環。 

   其他儀器請參照儀器說明書進行設置。

◆ 結果判定

①儀器自動判定結果,若顯示“陽性”,則樣品中含有蠟樣芽孢桿菌;若顯示“陰性”,則樣品中不含有蠟樣芽孢桿菌或含量低于檢測限。

②在熒光定量PCR儀上,根據有無“S”型擴增曲線判定結果。若有“S”型擴增曲線,則樣品中含有蠟樣芽孢桿菌;若無“S”型擴增曲線,則樣品中不含有蠟樣芽孢桿菌或含量低于檢測限。 

  • NG反應管結果顯示“陰性”,PG反應管結果顯示“陽性”,此次檢測結果有效,否則無效。如重復檢測結果仍為無效,請與技術支持人員聯系。
發布者:上海一基實業有限公司
聯系電話:021-60536261
E-mail:2851717098@qq.com

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