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5637(人膀胱癌細胞)復蘇、傳代和凍存方案【通過STR鑒定】

瀏覽次數:2129 發布日期:2018-5-28  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負

5637(人膀胱癌細胞)【通過STR鑒定】

規格:1×10⁶cells/T25培養瓶

細胞名稱

5637(人膀胱癌細胞)

種屬

年齡(性別)

男;68歲

組織來源

膀胱;癌

生長特性

貼壁

細胞形態

上皮細胞樣

背景描述

5637細胞能生成SCF、IL-1、IL-3、IL-6、G-CSF、GM-CSF等。

生長培養基

RPMI-1640+10% FBS+1% P/S

培養條件

氣相:空氣,95%;CO2,5%

溫度:37℃

 

一、 復蘇
1. 把凍存管從液氮中取出來,立即投入37℃水浴鍋中,輕微搖動。液體都融化后(大概1-1.5分鐘),拿出來噴點酒精放到超凈工作臺里。
2. 把上述細胞懸液吸到裝10ml培養基的15ml的離心管中(用培養基把凍存管洗一遍,把粘在壁上的細胞都洗下來),1000轉離心5分鐘。
3. 把上清液倒掉,加1ml培養基把細胞懸浮起來。吸到裝有10ml培養基的10cm培養皿中前后左右輕輕搖動,使培養皿中的細胞均勻分布。
4. 標好細胞種類和日期、培養人名字等,放到CO2培養箱中培養,細胞貼壁后換培養基。
5. 3天換一次培養基。
二、 傳代
1. 培養皿中的細胞覆蓋率達到80%-90%時要傳代。
2. 把原有培養基吸掉。
3. 加適當的胰蛋白酶(能覆蓋細胞就行),消化1-2分鐘。
4. 細胞都變圓后加如入等體積的含血清的培養基終止消化。
5. 用移液槍吹打細胞,把細胞都懸浮起來。
6. 把細胞吸到15ml的離心管中,1000轉離心5分鐘。
7. 倒掉上清液,加1-2ml培養基,把細胞都吹起來。
8. 根據細胞種類把細胞傳到幾個培養皿中。一般,癌細胞分5個,正常細胞傳3個。繼續培養。
三、  凍存
把細胞消化下來并離心(同上)。用配好的凍存液把細胞懸浮起來,分裝到滅菌的凍存管中,靜止幾分鐘,寫明細胞種類,凍存日期。4℃ 30min,-20℃ 30min,-80℃過夜,然后放到液氮灌中保存。 
凍存液的配制: 70%的完全培養基+20%FBS+10%DMSO. DMSO要慢慢滴加,邊滴邊搖。
要注意的就是無菌操作!

發布者:上海澤葉生物科技有限公司
聯系電話:021-61998551
E-mail:shzeysw@163.com

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