重組CHO細(xì)胞分離及蛋白收獲技術(shù)介紹
簡介：
現(xiàn)今，通過哺乳動物細(xì)胞培養(yǎng)，新一代生物制藥得到了前所未有的發(fā)展。本文主要介紹通過中空纖維微孔過濾，以分離哺乳動物分泌蛋白的過程。起始濃度為2×105 cell/ml，細(xì)胞外蛋白產(chǎn)物是一種與白介素-2相似的10kD淋巴因子，是一種潛在的腫瘤治療藥物。該應(yīng)用需要去除細(xì)胞和顆粒，而不裂解細(xì)胞，同時達(dá)到較高的蛋白回收率。由于產(chǎn)品為熱不穩(wěn)定，所以處理時間非常關(guān)鍵。
KrosFlo中空纖維過濾組件
工藝條件：
鑒于細(xì)胞濃度較低，600L的處理量通常只需要膜表面積為2-3m2 的過濾器。但該處理要求的時間較短，所以平行安裝了2個0.2 µm 截留分子量的KrosFlo組件，每個膜表面積為3.3 m2 。預(yù)計循環(huán)速度為70 L/min。過濾器進(jìn)口壓力固定為5 psig。當(dāng)過濾量達(dá)到處理量30%時，在過濾器出口施加10psig背壓，即將過濾器進(jìn)口壓力上升為15psig左右。除了小的調(diào)整之外，所有條件在處理過程中保持不變。
結(jié)果：
600L 樣品處理于65min完成過濾。穩(wěn)態(tài)流速為85 L/m2hr。過濾量與時間基本呈線性關(guān)系。為最大限度提高過濾量，處理過程中對壓力和流量稍做優(yōu)化。正如預(yù)期，過濾器的流率隨時間稍有衰減，但處理器的產(chǎn)物回收率仍可達(dá)到94%甚至更高。
通量 & 過濾量 vs. 時間
討論：
該處理中，目的蛋白會與聚砜膜緊密結(jié)合，但從經(jīng)濟(jì)上考慮，又需要有較高的產(chǎn)率。KrosFlo纖維膜具有良好的蛋白通道，作為一次性使用組件，可從工藝運(yùn)行開始到結(jié)束保持始終如一的膜特性，同時消除了膜清洗所需的成本和時間，并避免污染風(fēng)險。瑞普利金（原仕必純）膜組件具有多種不同的表面積規(guī)格，方便工藝處理時間的優(yōu)化。數(shù)據(jù)顯示，使用微孔中空纖維錯流過濾，可同時實(shí)現(xiàn)熱敏感產(chǎn)物的快速過濾和高回收量。
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