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疫苗生產(chǎn)降血清細(xì)胞培養(yǎng)工藝優(yōu)化方案

瀏覽次數(shù):7842 發(fā)布日期:2017-4-14  來源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)
隨著國家藥品監(jiān)督管理部門對藥品生產(chǎn)監(jiān)管力度越來越大,生物制藥和疫苗生產(chǎn)企業(yè)對產(chǎn)品安全性管理要求越來越高,在疫苗生產(chǎn)過程中采用無動物源成份的原輔料是日益增長的要求趨勢,但目前,絕大部分疫苗生產(chǎn)還離不開細(xì)胞培養(yǎng)過程中血清成份的添加,但使用血清,必須面對血清帶來的系列問題和缺點:
 
1.批間差較大:每批血清可能適合某些細(xì)胞系,換血清批號要做廣泛實驗,大量儲存提高成本,且很難實現(xiàn)大規(guī)模生產(chǎn)過程的標(biāo)準(zhǔn)化,也在一定程度上影響疫苗的批次穩(wěn)定性;
2.污染風(fēng)險:血清常受病毒污染,雖對多數(shù)細(xì)胞培養(yǎng)無害,但增加了不能控制的因素,一旦出問題,需要耗費相當(dāng)大的時間、物資和人力成本去解決;
3.不確定性:血清中含有廣泛的未知微量成分,對其存在的作用還遠(yuǎn)未搞清楚,也增加了純化和疫苗質(zhì)量控制的難度;
4.高成本:高質(zhì)量血清供應(yīng)不足,全球血清趨緊,且價格仍不斷上升,成本往往是細(xì)胞培養(yǎng)基成本的數(shù)倍,給疫苗生產(chǎn)企業(yè)帶來相當(dāng)大的成本壓力;
 
因此,如何降低血清在疫苗生產(chǎn)中的用量,從而減少使用血清帶來的風(fēng)險和高成本,是疫苗生產(chǎn)企業(yè)廣泛關(guān)注且努力尋找解決方案的重要問題。
 
與傳統(tǒng)的高血清含量細(xì)胞培養(yǎng)相比,采用低血清細(xì)胞培養(yǎng)方式,不僅能夠降低疫苗安全性風(fēng)險,還能提高企業(yè)生產(chǎn)效率,使用低血清培養(yǎng)基進(jìn)行疫苗生產(chǎn),細(xì)胞經(jīng)馴化適應(yīng)后,與傳統(tǒng)培養(yǎng)方式相比,細(xì)胞數(shù)量有顯著提高,細(xì)胞長滿單層時間大大縮短,分種比例、病毒滴度也有所提高,同時減少勞動強(qiáng)度,從而大大提高企業(yè)的生產(chǎn)效率,最重要的是,降低了疫苗生產(chǎn)企業(yè)的綜合成本。
 
北京西美杰科技有限公司(以下簡稱西美杰)為疫苗客戶引進(jìn)全球知名培養(yǎng)基營養(yǎng)添加物供應(yīng)商——KERRY,其高品質(zhì)的植物源蛋白水解物、復(fù)合非動物源性添加物系統(tǒng)、超濾酵母粉、重組低內(nèi)毒素白蛋白服務(wù)于全球疫苗生產(chǎn)企業(yè)、培養(yǎng)基生產(chǎn)企業(yè)近70年,為廣大疫苗客戶很大程度上解決了血清帶來的困擾。目前在國內(nèi),KERRY系列產(chǎn)品已經(jīng)廣泛應(yīng)用于疫苗生產(chǎn)的BHK、VERO、SF-9、MDCK、MRC5等細(xì)胞株中,上市疫苗品種有:口蹄疫疫苗、戊肝疫苗、流感疫苗等,血清使用量已經(jīng)從從10%降低到3%,少數(shù)客戶已經(jīng)實現(xiàn)了完全無血清培養(yǎng)。
 
使用KERRY Sheff-VAX系統(tǒng)用于VERO細(xì)胞降血清馴化案例

圖1. Vero細(xì)胞生長形態(tài)對比。(A)對照組:10%胎牛血清;(B):實驗組:0%胎牛血清+2g/L Sheff-VAX ACF。根據(jù)觀察,A對照組中的Vero細(xì)胞和B實驗組的細(xì)胞沒有不同。所有圖片都是用100X萊卡顯微鏡拍攝。


圖2. 以Vero細(xì)胞在含有10%的胎牛血清的培養(yǎng)基中生長曲線為對照組,對比細(xì)胞在逐漸減少血清的情況下加入Sheff-Vax添加物進(jìn)行細(xì)胞穿戴。DMEM作為基礎(chǔ)培養(yǎng)基。(i)10%胎牛血清;(ii)7.5%胎牛血清;(iii)5%胎牛血清;(iv)2.5%胎牛血清;(v)1.5%胎牛血清;(vi)1%胎牛血清;(vii)0.5%胎牛血清;(viii)0.25%胎牛血清;(ix)0.1%胎牛血清;(x)0 %胎牛血清。用逐漸減少血清的方法,可以實現(xiàn)Vero細(xì)胞的無血清培養(yǎng)。在同樣的培養(yǎng)基時間內(nèi),有添加物培養(yǎng)基中的細(xì)胞可達(dá)對照組細(xì)胞密度峰值的一半。但通過延長培養(yǎng)時間,可獲得更高的細(xì)胞密度峰值。

 
推薦疫苗生產(chǎn)細(xì)胞培養(yǎng)添加物系列產(chǎn)品介紹:
1. 全球獨家非動物復(fù)合添加物Sheff-VAX系列
貨號
品名
5X00426
SHEFF-VAX ACF
5X00484
SHEFF-VAX PLUS ACF
5X01143
SHEFF-VAX PF ACF
5X00512
SHEFF-VAX PLUS PF ACF
PF為無蛋白,plus為含微量元素
 
2. 非動物源Hypep系列
貨號
品名
5X99023
HYPEP 1510(大豆來源)
5X00713
HYPEP 4601N(小麥麩來源)
5X00794
HYPEP 5603N(大米來源)
5X00001
HYPEP 7504(棉籽來源)
5X00213
HYPEP YE(酵母來源)
5X00214
ULTRAPEP YE(酵母來源)
 
3. 其他相關(guān)產(chǎn)品
貨號
品名
5X01090
SHEFF-VAX Plus PF ACF VP 產(chǎn)毒階段使用,增加病毒產(chǎn)量
5X01302
Sheffield rAblumin LE 重組低內(nèi)毒素白蛋白
30624799
Sheffield rTrypsin ACF 重組胰酶
20460791
Sheffield Trypsin 1:250 豬來源胰酶
30650974
Sheffield TrypStop ACF 胰酶抑制劑
 
由于低血清培養(yǎng)基在成分配比上與基礎(chǔ)培養(yǎng)基有所不同,其培養(yǎng)液的pH、滲透壓及碳酸氫鈉添加量等有所改變,以及細(xì)胞生長速度、分種比例、收毒時間及次數(shù)等都與用戶以往的經(jīng)驗和習(xí)慣不同,在使用低血清培養(yǎng)基時,容易給用戶造成一定的困難。因此,要使用好低血清培養(yǎng)基,用戶必須打破以往形成的使用習(xí)慣,以一種全新的姿態(tài)來認(rèn)識低血清培養(yǎng)基。
 
發(fā)布者:北京西美杰科技有限公司
聯(lián)系電話:4000-50-4006,010-88597838,021-63599871/72(上海分公司)
E-mail:info@xmjsci.com

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