LiveTissue 活腫瘤組織凍存技術常見問題解答

瀏覽次數：4231　發布日期：2017-2-14　來源：本站　僅供參考，謝絕轉載，否則責任自負

1. 可以凍存什么樣大小的腫瘤組織？

可以凍存腫瘤患者的手術組織和穿刺組織，也可以保存PDX鼠的傳代腫瘤組織。

2. 新鮮的腫瘤組織怎樣保存和運輸？

應浸于我們的組織運輸液或完全培養基內，0~4℃低溫保存，于2小時內低溫運輸到實驗室立即凍存處理。鑒于手術組織容易酸化腐爛，普通的組織運輸液和完全培養基不能長期保存腫瘤組織，所以我們在開發能長期保存（~7天）組織的運輸液，屆時我們將通過微信公眾號發布該產品。

3. 凍存處理前組織標本要注意什么？

獲得腫瘤病人的知情同意；保存好原始完整病歷檔案；確認無HBV、HCV、HIV等病毒感染，防止處理過程中造成標本間交叉污染，確保實驗人員的安全防護。

4. 凍存腫瘤組織需要多久操作時間？

做一批實驗，1~4份穿刺的腫瘤組織需要30分鐘左右，1~3份手術組織需要60~90分鐘左右。

5. 組織凍存和復蘇的操作注意事項和關鍵步驟有哪些？

成功的凍存和復蘇必須注意快速降溫和快速升溫。即，組織移入、移出液氮時，要在液氮上操作，并且速度要快。

6. 組織切片模具和刀片能重復使用嗎？怎樣消毒？

組織切片模具可以重復使用，可以用75%酒精浸泡并晾干后使用，也可以浸泡后高壓滅菌再使用。刀片為無菌分裝一次性使用。

7. 有些腫瘤組織非常有彈性，不容易切片怎么辦？

按照我們的教學視頻，通常需要2個刀片固定腫瘤組織。如果由于組織彈性太大而不容易固定，可以用3個刀片固定，或者將組織切割成更小體積，再用刀片固定。

8. 細胞凍存通常要求冰上操作，為什么腫瘤組織凍存說明書上要求26℃處理？這樣會對組織造成損傷嗎？

任何凍存方法對細胞或者腫瘤組織都會造成不同程度的損傷。組織凍存不僅要冷凍保存多層細胞，還要保存細胞間質，選擇合適的冷凍時間和溫度很重要。如果溫度太低，滲透速度太慢需要更長的處理時間，溫度太高則冷凍保護劑有一定毒性。我們選擇26℃是因為在這個溫度下，凍存液中的冷凍保護劑在相對短的時間內能夠快速滲透到細胞和細胞間質中。

9. 組織凍存是把組織浸在凍存液V1、V2后直接存放液氮罐嗎？

不是。本試劑盒的方法是將組織切成均勻的薄片，再使用凍存液梯度處理組織薄片使冷凍保護劑滲透至組織內，多余的冷凍液需要棄去。凍存的是組織，不包含大量的凍存液。

10. 液氮處理后，組織會從金屬的組織支架上掉下來嗎？

不會，組織會固定在支架上。

11. 組織支架上為什么有很多小孔？

為了快速熱傳導，玻璃化凍存需要急劇降溫。

12. 可以先把組織及組織支架放入凍存管后，再把凍存管放入液氮中急劇降溫處理嗎？

不可以，凍存管的熱傳導效率差，不能達到玻璃化冷凍要求的急劇降溫速度。

13. 為什么組織支架要在液氮中浸潤5分鐘以上？

為了使腫瘤組織降溫充分和均勻。

14. 液氮冷凍處理后的組織能放到-80℃冰箱后，再轉入液氮罐嗎？

不能。液氮冷凍處理后的組織<-135℃是玻璃化冷凍狀態，如果放到超低溫冰箱，造成溫度上升，組織細胞內會形成冰晶，造成組織壞死，不能繼續使用。