某寶典卷首曰：“欲練神功，必先自宮。”卷尾曰：“即使自宮，未必成功。”這個慘痛案例告訴我們，欲成大事必付出常人難及的巨大代價，然而最終是否成功，仍有很多因素影響，練錯一招，走火入魔。臨床醫生做科研亦如此，白天忙臨床已經是一把辛酸淚，還要晚上寫文章、申課題，簡直是滿紙荒唐言。

倘若砸下百萬經費就能發CNS，世界和平就不再是夢想，可惜隔行如隔山，縱使柳葉刀旋轉跳躍不停歇，一樣會落入基因測序的惡性循環；寶貴的臨床樣本堆積成山，如何修煉科研神功，將之化為文章的金礦？少年郎，陳博見你骨骼驚奇，請收下這部《蛋白質組研究寶典》。

寶典總綱：“天之道，損有余而補不足，是故虛勝實，不足勝有余。”陳博給大家強行翻譯成大白話：蛋白質是一切生命活動的直接參與者，蛋白質表達的差異將影響到相關的生理功能變化，蛋白質組學研究是揭示疾病相關分子機制的最直接研究手段，iTRAQ技術是最常用的蛋白質組學研究方案。

譯文：樣本+iTRAQ+WB。這是最簡單粗暴但有效的蛋白質組學研究套路，在臨床樣本中用iTRAQ找到差異蛋白，經過最基本的數據分析后，進行WB或IHC的驗證，發在諸如：Proteomics、Proteome Sci、Plos One等雜志上，屢試不爽。如下例：

Fang P, Ying H, et al. Dissecting characteristics and dynamics of differentially expressed proteins during multistage carcinogenesis of human colorectal cancer. World J Gastroenterol. 2016. (IF=2.8)

這篇文章用一臺5600質譜儀做iTRAQ（目前蛋白質組研究中，主流的高分辨率質譜是QE或5600），在樣本中找到3000多種差異蛋白，并做了GO分析、聚類分析、數據統計等最基本的數據分析，最后做了IHC驗證，影響因子2.8分。

此類研究周期短、花錢少、文章好發、有深挖潛力，實乃搶時間畢業、趕時間結題的神器！作為接下來一系列課題申請的前期研究，這足以打下堅實的基金申請基礎。

譯文：細胞+基因芯片+iTRAQ+WB+功能驗證。遙想當初，很多老師意氣風發砸錢做芯片，數據堆積如山，一臉懵逼。然而如今世風日下，基因芯片灌水發文章很難上5分，怎么將課題繼續下去？其實芯片數據結合蛋白質組學可以玩出新花樣，比如下面這篇：

Cheng DD, Yu T, et al. MiR-542-5p is a negative prognostic factor and promotes osteosarcoma tumorigenesis by targeting HUWE1. Oncotarget. 2016. (IF=5.0)

作者甚至沒有臨床樣本，只在細胞水平通過miRNA芯片找到功能miRNA，隨后干擾miRNA，做細胞水平的iTRAQ，找到了miRNA的作用靶點，并進行了WB驗證，最終做了簡單的功能驗證，影響因子5.0分。

此外，在5分這一檔上，還有個iTRAQ灌水小神器：SCIENTIFIC REPORTS雜志(IF=5.2)。其中的蛋白質組研究套路非常簡明：臨床樣本+iTRAQ+數據分析+WB/IHC+功能驗證。對于經費緊張的老師，這是目前發5分文章性價比最高的方案之一。

譯文：臨床樣本+ iTRAQ + WB/IHC +功能驗證+臨床相關性。轉化醫學的輪回，就是從臨床出發，再回到臨床。若要將研究檔次再上一層樓，從5分向10分攀登，必然要回到大量臨床樣本的驗證中，將新發現的Biomarker的臨床相關性予以證實。下面這篇文章，若能在分子機制上略加探索，分數再上一層樓絕不是問題：

Chiung HH, Chia WH, et al. Identification and characterization of potential biomarkers by quantitative tissue proteomics of primary lung adenocarcinoma. Mol Cell Proteomics. 2016.(IF=5.9)

此時，發文章已經不再是唯一的目標，找到更有臨床價值的Biomarker，做成診斷試劑盒，申請專利，開公司，走上人生巔峰將不再是遙不可及的夢想。

譯文：臨床樣本 + iTRAQ + 蛋白質組對基因組的深度注釋。第四重功法變化多端，突破10分之后，每一項研究都飽含了深思熟慮，無法簡單重復，只可意會不可言傳，這里只能略舉一例：

Mertins P, Mani DR, et al. Proteogenomics connects somatic mutations to signalling in breast cancer. Nature. 2016. (IF=38.1)

（詳見上期文章《蛋白組學之逆襲，深度注釋基因組》）

今日華山論劍，陳博只分享神功的前四重境界，其余五重心法奧妙無窮，兇險異常，不可輕易嘗試。其意博，其理奧，其趣深，天地之象分，陰陽之候列，變化之由表，死生之兆彰，不謀而遺跡自同，勿約而幽明斯契，稽其言有微，驗之事不忒，誠可謂至道之宗，奉生之始矣。

蛋白質組學研究是臨床醫生的萬金油，想充分利用手里的臨床樣本？想發高檔次文章？想設計自己的研究方案？請通過下方郵箱或微信與陳博聯系，陳博給你開小灶。