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Goldview I核酸染料——EB替代品的原理及使用方法

瀏覽次數:8510 發布日期:2012-1-6  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負
    GoldView(GV)是一種可代替溴化乙錠(EB)的新型核酸染料,其靈敏度與EB相當,使用方法與之完全相同,在100ml瓊脂糖膠溶液中加入5μl GoldView即可。在紫外透射光下雙鏈DNA呈現綠色熒光,也可用于染RNA。由于未發現GoldView有致癌作用,且靈敏度與EB相當,將有可能逐漸取代EB而得以廣泛應用。
  概 述
  GoldView是一種可代替溴化乙錠(EB)的新型核酸染料,采用瓊脂糖電泳檢測DNA時,GoldView與核酸結合后能產生很強的熒光信號,其靈敏度與EB相當,使用方法與之完全相同。在紫外透射光下雙鏈DNA呈現綠色熒光,而且也可用于染RNA。
  通過Ames試驗、小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核試驗、小鼠睪丸精母細胞染色體畸變試驗,致突變性結果均為陰性;而溴化乙錠(EB)是一種強致癌劑。因此用Goldview代替EB不失為一種明智的選擇。
  使用方法
  1. 將100ml瓊脂糖凝膠溶液(濃度一般為0.8%~2%)在微波爐中融化。
  2. 加入5μl GoldView,輕輕搖勻,避免產生氣泡。
  3. 冷卻至不燙手時倒膠,待瓊脂糖凝膠完全凝固后上樣電泳。
  4. 電泳完畢在紫外燈下觀察。若使用數碼相機照相記錄,則關閉相機的閃光燈,放在自動檔即可;若使用凝膠成像系統照相,通過調節光圈、曝光時間,選擇合適的濾光片,可得到成像清晰、背景較低的照片。
  注意事項
  1. 膠厚度不宜超過0.5cm,膠太厚會影響檢測的靈敏度。
  2. 加入GoldView的瓊脂糖凝膠反復融化可能會對核酸檢測的靈敏度產生一定影響,但不明顯。
  3. 通過凝膠電泳回收DNA片段時,建議使用GoldView染色,在自然光下切割DNA條帶,避免紫外線與EB對目的DNA產生的損傷,可明顯提高克隆、轉化、轉錄等分子生物學下游操作的效率。
  4. 雖然未發現GoldView有致癌作用,但對皮膚、眼睛會有一定的刺激,操作時應戴上手套。
發布者:北京中生瑞泰科技有限公司
聯系電話:010-63250233
E-mail:ruitaibio2010@163.com

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