凝血功能紊亂是COVID-19致病性的主要因素，但關于細胞外囊泡（EVs）和殘留細胞（RCs）參與的研究數據有限。使用Apogeeflow 納米流式儀分析EVs中CD61、CD235a、CD45和CD31的含量，分別用于檢測血小板、紅細胞、白細胞或內皮細胞，而磷脂酰絲氨酸EVs/RCs則通過乳酸粘附素的結合表示促凝劑催化。忽略細胞來源D-二聚體增加的患者表現出最高的RCs和sEVs數量。血小板活化，反映在CD61+和乳酸粘附素+ mEV和RCs水平升高，與凝血障礙有關。低D -二聚體患者可以通過CD41a + sEVs的四跨蛋白特征與對照組區分開來，這表明循環血小板sEVs亞群的變化可能在COVID感染期間具有一定預后價值。

研究背景與目的:

嚴重的COVID-19感染會引起頻繁的凝血和止血障礙，幾種COVID-19感染的常見實驗室結果包括血漿D-二聚體和纖維蛋白原水平高、白細胞增多伴淋巴細胞減少、血小板增多和貧血。關于COVID-19應答對細胞介導的止血的影響的數據有限。血小板還通過膜受體直接與病原體相互作用，參與免疫反應。活化的血小板釋放異質的細胞外囊泡（EVs），被認為介導炎癥和凝血。血小板源性EVs在多種炎癥條件下增加，包括自身免疫性疾病，以及癌癥和病毒感染。與COVID -19陰性患者相比，住院的COVID-19患者中血小板衍生抗體的數量也有所增加。

Apogee Flow納米流式細胞儀的應用：EVs分析中的重要工具

Apogee Flow納米流式細胞儀是一種先進的細胞分析技術，特別適用于微小顆粒和細胞外囊泡的檢測。該儀器結合了高靈敏度的散射光和熒光檢測系統，以及精確的流體控制系統，能夠提供高分辨率的顆粒分析和細胞分型能力。

儀器在EVs檢測應用：Apogee Flow納米流式細胞儀在EVs檢測中具有顯著優勢。它能夠準確區分不同大小和類型的EVs，包括外泌體、微泡等，同時提供關于EVs表面標記物、內部成分和生物活性的詳細信息。這使得Apogeeflow成為研究EVs在COVID-19感染的重要工具。

檢測精度與優勢:Apogee Flow納米流式細胞儀在EVs檢測中的精度和優勢主要體現在以下幾個方面：首先，它能夠檢測到低至納米級的顆粒，滿足對微小EVs的檢測需求；其次，它能夠提供多參數分析，同時檢測EVs的大小、形狀、表面標記物和內部成分；最后，它具有高通量檢測能力，能夠快速處理大量樣本，提高研究效率。

實驗結果：

利用流式細胞術分析EV的過程如圖1所示。實驗細節包括抗體克隆、代表性散點圖和門控策略。將20微升血漿稀釋，然后用2-2.5µl以下抗體在室溫下黑暗孵育2小時：藻紅蛋白（PE）偶聯CD31、異硫氰酸熒光素（FITC）偶聯CD45、PE偶聯CD61和FITC偶聯CD235a，或用3.15µl FITC偶聯乳粘附素。所有樣本都在A50-Micro（Apogee Flow Systems ）上進行測量，計數率保持在1000到4000之間(圖1)。

圖1.采用高靈敏度流式細胞儀（hsFCM）進行分離分別表征EVs。

實驗結果顯示，在Apogee Flow分析中，與低D-二聚體組和對照組相比，高D-二聚體組CD61、CD235、CD31、CD45和乳酸粘附素的lEVs/RCs陽性均升高（圖2）。

圖2. 高靈敏度流式細胞術檢測殘余細胞/大細胞外囊泡（1000-4000 nm）和中等細胞外囊泡（200-1000 nm）。

結論：Apogee Flow納米流式細胞儀在COVID-19研究中具有重要作用。它能夠檢測和分析血小板微粒的數量和活性變化，從而揭示血小板在COVID-19病理過程中的作用。此外，它還能夠檢測其他細胞外囊泡和病毒顆粒，為研究COVID-19的病毒感染機制和免疫反應提供重要信息。該儀器的高靈敏度和高分辨率使得它能夠準確區分和計數不同大小的顆粒，為疾病的早期診斷和預后評估提供有力支持。

原文：Increased circulating platelet-derived extracellular vesicles in severeCOVID-19 disease

Apogee Flow納米流式細胞儀的優勢

Apogee Flow納米流式細胞儀作為流式細胞術的一種高級形式，具有更高的靈敏度和分辨率，能夠檢測更小的顆粒和更復雜的細胞結構。它在細胞生物學、免疫學、病毒學等領域有廣泛應用，為研究細胞的功能、相互作用和疾病機制提供了重要手段。

英國Apogee超靈敏納米流式分析儀，專為外泌體微囊泡（EVs）等小顆粒分析優化設計，在EVs樣品顆粒大小分析，絕對定量，多標記物同時快速分析工作中廣泛應用。截止目前，該設備已累計參與數百篇高質量同行審議文章相關實驗分析工作。其出色的靈敏度，穩定性及可靠性已備受業內廣泛認可，并將繼續為EVs相關基礎研究及轉化應用提供堅實支持。

Apogee納米流式除了可用于納米級別的顆粒 （如：細胞外囊泡、外泌體、微生物、病毒顆粒、LNP） 等，還可以用于作常規動物細胞檢測 （如免疫細胞、哺乳類動物細胞、等）。它是一臺全面且功能強大的納米流式分析儀！

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