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單核和空間轉(zhuǎn)錄組學(xué)揭示家蠶終幼蟲(chóng)期分泌絲器官的結(jié)構(gòu)

瀏覽次數(shù):1193 發(fā)布日期:2024-9-18  來(lái)源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)


期刊:Cell Reports

影響因子:7.383
伯豪試劑產(chǎn)品:伯優(yōu)®細(xì)胞核分離試劑盒

研究背景
天然蠶絲因其卓越的機(jī)械性能、生物相容性和生物降解性,在生物醫(yī)學(xué)、組織工程和食品工業(yè)等領(lǐng)域具有廣泛應(yīng)用前景。然而,大部分絲分泌物種無(wú)法在人工飼養(yǎng)條件下大規(guī)模生產(chǎn)蠶絲蛋白。蠶絲腺分為前、中、后三部分,各自具有不同的功能。盡管已有研究揭示了蠶絲腺的一些特性,但對(duì)絲腺細(xì)胞的異質(zhì)性和高分辨率的分子特征仍缺乏深入了解,這限制了人們對(duì)高效蠶絲蛋白合成機(jī)制的理解。因此,需要進(jìn)一步探索絲腺細(xì)胞在幼蟲(chóng)末期階段如何高效合成蠶絲蛋白的分子機(jī)制。

伯豪產(chǎn)品
伯優(yōu)®細(xì)胞核分離試劑盒

研究目的
本研究希望通過(guò)單核RNA測(cè)序(snRNA-seq)和空間轉(zhuǎn)錄組學(xué)(ST)技術(shù),系統(tǒng)地繪制蠶絲腺的細(xì)胞類型和空間組成圖譜,以期為高效蠶絲蛋白合成機(jī)制提供更深入的理解和參考。

研究結(jié)果
1. 幼蟲(chóng)末期蠶絲腺細(xì)胞的時(shí)空分布
為了闡明幼蟲(chóng)末期蠶絲腺細(xì)胞的時(shí)空結(jié)構(gòu),研究者首先對(duì)家蠶(B. mori)和其祖先(B. mandarina)的絲腺核進(jìn)行了單核RNA測(cè)序(snRNA-seq)。基于78,785個(gè)高質(zhì)量單核的轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù),識(shí)別出11個(gè)細(xì)胞簇,并根據(jù)標(biāo)記基因的功能注釋和實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,確定了它們的分布和細(xì)胞類型分類。

在前絲腺(ASG)中,識(shí)別出5個(gè)細(xì)胞簇(snC_2, -3, -4, -5, 和 -9),分為三種細(xì)胞類型:分解代謝細(xì)胞(CBCs)、能量供應(yīng)和代謝細(xì)胞(ESMs)和上皮細(xì)胞重塑細(xì)胞(ECRs)。在中絲腺和后絲腺(MSG/PSG)中,識(shí)別出6個(gè)細(xì)胞簇(snC_1, -6, -7, -8, -10, 和 -11),分為四種細(xì)胞類型:非繭絲膠蛋白合成細(xì)胞(NCSs)、繭絲膠蛋白合成和分泌細(xì)胞(CSSs)、絲素蛋白合成和分泌細(xì)胞(FBSs)和體內(nèi)平衡細(xì)胞(HMSs)。
 


2. 絲腺細(xì)胞在絲蛋白合成過(guò)程中的功能動(dòng)態(tài)變化
通過(guò)偽時(shí)間軌跡分析發(fā)現(xiàn),絲腺細(xì)胞在幼蟲(chóng)末期經(jīng)歷了三個(gè)分支和七個(gè)細(xì)胞狀態(tài)。在L4M和L5D1階段,細(xì)胞狀態(tài)以1、2和7為主,而在L5D3階段,細(xì)胞狀態(tài)3和4顯著增加,表明這是絲蛋白高效合成的重要轉(zhuǎn)折點(diǎn)。在L5D3階段,絲蛋白基因(如fibH, fibL, P25, Ser1, 和 Ser3)的表達(dá)顯著增加,而Ser2和MBF2的表達(dá)下降,表明絲蛋白合成從抑制狀態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)榛钴S狀態(tài)。

 


3. 絲蛋白合成的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)和細(xì)胞間通訊
研究者識(shí)別了687個(gè)轉(zhuǎn)錄因子(TFs),其中177個(gè)在細(xì)胞類型特異性或普遍性表達(dá)中較高水平。通過(guò)差異表達(dá)轉(zhuǎn)錄因子(DETFs)分析,發(fā)現(xiàn)TFs在每個(gè)發(fā)育階段對(duì)絲蛋白基因的調(diào)控具有明顯的時(shí)間差異。

在FBSs、CSSs和NCSs中,特定TFs(如Dimm、FOXO、VSX2、CrebA和Xbp1)對(duì)絲蛋白基因具有顯著的調(diào)控作用。通過(guò)CelIPhoneDB分析發(fā)現(xiàn),細(xì)胞間通訊在L5D3階段的MSG/PSG細(xì)胞中最為頻繁,特別是HMSs與其他細(xì)胞類型之間的通訊,表明細(xì)胞間通訊在絲蛋白大規(guī)模合成過(guò)程中起到重要作用。
 



4. 與絲腺內(nèi)復(fù)制相關(guān)的細(xì)胞周期基因
研究發(fā)現(xiàn),絲腺細(xì)胞在幼蟲(chóng)末期通過(guò)內(nèi)復(fù)制過(guò)程獲得高度分支的細(xì)胞核,這是合成絲蛋白所必需的。CDK抑制劑(CKI)基因在絲腺細(xì)胞中高度表達(dá),表明細(xì)胞生長(zhǎng)受到抑制。特別是CycG和CycT這兩個(gè)細(xì)胞周期蛋白在MSG/PSG細(xì)胞類型中普遍表達(dá),可能作為絲腺內(nèi)復(fù)制周期的核心調(diào)控因子。

 


5. 蛻皮激素受體在絲腺內(nèi)復(fù)制中的不可或缺作用
研究發(fā)現(xiàn),蛻皮激素受體(EcR)和超螺旋蛋白(USP)在幾乎所有絲腺細(xì)胞類型中普遍且相對(duì)高度表達(dá)。通過(guò)轉(zhuǎn)基因過(guò)表達(dá)實(shí)驗(yàn),發(fā)現(xiàn)USP的過(guò)表達(dá)導(dǎo)致絲腺細(xì)胞數(shù)量顯著減少和絲腺退化,特別是幼蟲(chóng)末期。過(guò)表達(dá)USP的PSG中,許多細(xì)胞周期相關(guān)基因顯著上調(diào)或下調(diào),表明USP在絲腺發(fā)育和內(nèi)復(fù)制過(guò)程中起到關(guān)鍵的調(diào)控作用。
 

 

研究總結(jié)
本研究通過(guò)snRNA-seq和ST技術(shù),系統(tǒng)地描繪了家蠶在幼蟲(chóng)末期絲腺細(xì)胞的時(shí)空分布和功能動(dòng)態(tài)變化。研究揭示了絲腺細(xì)胞類型及其在絲蛋白合成中的角色,闡明了細(xì)胞狀態(tài)轉(zhuǎn)變、調(diào)控網(wǎng)絡(luò)和細(xì)胞間通訊在高效絲蛋白合成中的作用,并強(qiáng)調(diào)了蛻皮激素受體(尤其是超螺旋蛋白)在絲腺內(nèi)復(fù)制中的不可或缺作用。這些發(fā)現(xiàn)為理解蠶絲腺的分子機(jī)制提供了重要參考,并為開(kāi)發(fā)可持續(xù)的天然絲蛋白產(chǎn)品提供了新的視角。

原文鏈接:
https://doi.org/10.1016/j.celrep.2024.114460

發(fā)布者:上海伯豪生物技術(shù)有限公司
聯(lián)系電話:021-58955370
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