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C2C12細胞培養操作指南

瀏覽次數:2789 發布日期:2023-8-8  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負
名稱:C2C12 小鼠成肌細胞
名稱 C2C12 (小鼠成肌細胞)
別稱 C2c12;C2-C12;C12
種屬 小鼠
生長特性 貼壁細胞
細胞形態 成肌細胞樣
傳代融合度 70%
凍存液 55% 基礎培養基 + 40% FBS + 5% DMSO
推薦傳代比例 1:3 - 1:4
推薦換液頻率 2-3次/周

 

 

細胞簡介


圖片來源:ATCC

推薦培養體系:

DMEM 【VivaCell C3113】+ 10% FBS 【VivaCell C04002】+ 1% P/S 【VivaCell C3420】

 

 

 

細胞培養步驟 

待細胞融合度約70%時即可進行傳代。

以T25培養瓶為例:

  1. 吸出原培養液;加入2ml左右PBS【VivaCell C3580】,輕輕晃動培養瓶潤洗細胞,吸出PBS丟棄;

  2. 加入1ml左右0.25%胰蛋白酶溶液【VivaCell C3530】,輕輕晃動培養瓶使之浸潤所有細胞后放入培養箱消化約3 min,顯微鏡下觀察多半呈流沙狀,終止消化;(全程不要拍打培養瓶)

  3. 離心,300g、3min,離心完吸出上清丟棄;

  4. 加入新鮮培養基,將細胞吹到成單個,經計數,均勻接種到新培養瓶中,補足培養基至5ml,放培養箱進行培養。

 

 

細胞誘導分化  

由于C2C12細胞分化很快,對于研究對理解肌肉細胞發育和修復(再生)是非常重要的。低濃度的馬血清能夠有效刺激C2C12成肌細胞向成熟細胞分化。

 

我們在這里也簡單介紹下誘導分化的相關知識:

01

  誘導體系: 

DMEM 【VivaCell C3113】+ 馬血清 【VivaCell C2510】(常見比例為2%)+ 1% P/S 【VivaCell C3420】

 

 

02

  簡述細胞誘導步驟: 

待細胞生長至融合度約過80%時。

  1. PBS【VivaCell C3580】潤洗細胞后吸出PBS丟棄;

  2. 換誘導分化培養基,后續每24h換液一次,在顯微鏡下觀察細胞形態和生長狀況。

 

03

  誘導時刻關鍵步驟: 

  • 誘導前提:低代次,細胞狀態很好的C2C12細胞

  • 融合時間:在其融合率剛過80%,換含有馬血清(一般是2%比例)完全培養液。之后需要每天進行換液

  • 誘導時間:正常7天內可成功

  • 提示:誘導的期間會有不少的死亡細胞,也有又成肌細胞的緩慢生長,是正常的

  • 成功的標志:最后可以看見肌管,表現為厚的管狀結構,有時為多核

 


圖片來源:網絡,侵刪
 
 

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標簽: 細胞培養
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