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鱟試驗法中的干擾因素與解決方法介紹

瀏覽次數(shù):767 發(fā)布日期:2022-11-10  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負

由鱟試驗的反應機理我們可以知道:內(nèi)毒素在二價陽離子參與下,作用凝集酶系統(tǒng)而發(fā)生一系列生化反應,最后形成凝膠。因此,一切阻礙反應機制的因素,均干擾凝膠的形成,形成假陰性結果,作為干擾凝集反應的物質(zhì)主要有:人血中的多種凝血因子、很多中藥成分、某些生化藥品、抗生素、可使蛋白質(zhì)變性的物質(zhì)、高糖溶液、絡合物等等,此外樣品的pH值,反應溫度等也都有一定的影響(表2)。
 


另外一些金屬離子(如 Fe、Al、Ca)會對細菌內(nèi)毒素活性產(chǎn)生影響,從而出現(xiàn)假陰性結果,因此在實驗時,避免使用一些金屬用具,而使用玻璃用具。

關于供試品中自身成分的影響,可以說是鱟試驗中影響因素最大的,作為供試品,既有對LAL或TAL試劑的活性產(chǎn)生影響的因素,也有對細菌內(nèi)毒素的活性產(chǎn)生影響因素,因此在實際測定時要引起注意。

(1)供試品對鱟試劑的活性產(chǎn)生影響的因素為:蛋白酶、蛋白酶抑制作用,螯合劑、蛋白變性劑等。

(2)供試品對細菌內(nèi)毒素的活性產(chǎn)生影響的因素:金屬離子(鐵、鋁、鍺等),表面活性劑等。

(3)對主反應以外的測定系統(tǒng)產(chǎn)生影響的場合:濁度、顏色、磺胺制劑(合成基質(zhì)化的偶氮化反應時)等。
 


在這些共存物質(zhì)的影響當中,特別要引起注意的是些外界金屬離子的影響,尤其是在舊菌內(nèi)毒素標準品的溶解及稀釋過程中一定特別注意金屬離子的混入,最好的方法是使用玻璃制備的蓋子。

對于大多數(shù)的注射劑一般在原液時均存在干擾作用,然而當把樣品用水進行稀釋后即可排除干擾,而對于稀釋法不能排除干擾的樣品,可考慮用其他方法給予解決。如:中和法、過濾法以及透析方法等,目前市場上見到鱟試劑主要為TAL試劑和LAL試劑。因為工藝不同,抗干擾能力的強弱不一,因此對同一樣品、使用不同廠家的LAL試劑所出現(xiàn)的最大無干擾濃度是不同的,這一點要引起注意。另外,TAL試劑和LAL試劑是否完全等活性關系還有待進一步研究和探討。

發(fā)布者:科德角國際生物醫(yī)學科技(北京)有限公司
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