C.WASH清洗在ELISA洗板與加樣步驟的使用
一、酶聯免疫吸附試驗（ELISA）
酶聯免疫吸附試驗（ELISA）是一種廣泛應用在測定液體樣本中的蛋白、抗體或激素的免疫分析技術。ELISA的標準程序通常是把蛋白、抗體或抗原直接或是以捕捉抗體固定在固相載體上，再加入一級檢測抗體，形成一個抗原抗體的復合物。如果該抗體已經用酶標記了，即可用來直接測定抗原的量，若沒有，則利用另一個酶標記的二級抗體來測定抗原的量。測定抗原量的方法是加入該酶的底物，作用后產生出現的顏色深淺和樣本中的抗原量呈正比的關系，依此原理計算出樣本中的抗原總量或濃度。
二、C.WASH非接觸式微孔板樣品處理系統
C.WASH非接觸式微孔板樣品處理系統是一種非接觸式洗板機和分液設備的組合，它采用獨特的反向離心技術可以快速且可重復地去除96、384和1536孔板上殘留量非常低的液體，能夠全自動完成ELISA檢測中的所有清洗步驟。
圖2. C.WASH 非接觸式微孔板樣品處理系統
相比傳統吸液式洗板機和傳統手工拍板，C.WASH非接觸式微孔板樣品處理系統有以下優勢：
1. 清洗效果優異
使用C.WASH 進行清洗后，每個微孔的殘留體積< 0.1uL，降低背景信號，輕松提升信噪比，因此可以提高實驗的穩定性和成功率。并且信噪比的顯著提升可以帶來整體實驗體積的縮小，減少試劑的使用量，降低實驗成本。
2. 清洗方式更加科學
采用非接觸式注液，反向離心方式移除清洗，杜絕傳統Tip-based washer引起的交叉污染問題，也可避免傳統方法對板底細胞的損傷。
3. 快速、自動化
數秒即可自動去除整個96孔板、384孔板和1536孔板上的液體，有效節省時間，從而縮短整體項目周期。
4. 操作簡單
操作軟件設計直觀，提供快速訪問選項卡，有效提升效率。基于SiLA2 接口的完善通信支持與API集成，能夠與第三方控制軟件相兼容。
圖3. C.WASH優化ELISA中的清洗過程
三、ELISA實驗使用C.WASH清洗案例
THP-1是一種來源于急性單核細胞白血病患者的懸浮細胞系，通常用作人類單核細胞的細胞系模型。加入PMA后，單核細胞分化為具有巨噬細胞樣特征的粘附細胞。用脂多糖（LPS）處理活化的THP1細胞可以模擬細菌感染并誘導促炎基因的表達。活化巨噬細胞信號級聯中最早的細胞因子之一是TNF-α，這種細胞因子參與幾乎所有的炎癥反應，并調節免疫細胞的活動。
本次實驗使用商用ELISA試劑盒量化分泌到受刺激的THP-1細胞培養上清中的TNF-α的量，完整的工作流程如圖4所示，在所有試劑添加之間，使用C.WASH非接觸式微孔板樣品處理系統或手動清洗微孔板。
實驗結果一：C.WASH與手動清洗效果相當
使用ELISA檢測細胞培養上清液（A）和兩種不同濃度的TNF-α標準品（B和C）的TNF-α濃度，并對ABC三種情況分析了微孔板上的16個孔（A-P）。ELISA結果顯示，使用C.WASH自動清洗與手動清洗產生的TNF-α濃度非常相似，如圖5所示。圖6顯示了手動清洗和C.WASH清洗的校準曲線，兩條曲線具有可比性，R2值為0999。
圖5.手動清洗（藍色）和C.WASH（綠色）清洗測量TNF-α濃度結果
實驗結果二：C.WASH節省耗材
C.WASH的所有清洗步驟均在不使用任何槍頭的情況下進行，假設每個孔使用一個槍頭手動移除試劑/洗滌緩沖液，并且每次加清洗緩沖液時使用一組12個槍頭，每次清洗總計396個槍頭，一個384孔板的完整ELISA實驗手動清洗總計需要5940個槍頭，而C.WASH則在整個清洗過程中不需要使用一個槍頭（表1）。
實驗結果三：快速且自動化
對于一個完整的384孔板，C.WASH一個清洗周期為40s，而手動去除液體，時間包括輕敲以確保低殘留量以及手動添加新的清洗液洗，至少慢4倍（約3分鐘）。清洗步驟節省的時間與15個清洗周期相乘，C.WASH自動洗板的總時間大幅減少，整個ELISA實驗只需要10分鐘時間，手動清洗則需要大概45分鐘（表1）。
總之，C.WASH清洗與傳統手動方法相比，減少了執行ELISA清洗步驟所需的時間和成本，并且通過自動化清洗步驟，可實現更高的再現性和一致的數據質量。
四、C.WASH 的其他應用領域
C. WASH非接觸式微孔板樣品處理系統不僅可以應用于ELISA分析，基于其創新的清洗方式，還可以在其他領域發揮出重要作用：
✔ 細胞實驗：通過降低背景值和變異系數，可以改善數據質量并提升細胞檢測中的 z 值。
✔ 高通量篩選：提供完善的API，確保只需很少的維護，可與全自動工作流程無縫集成。
✔ 面向下一代測序的DNA純化：在NGS文庫制備工作流程中，能夠在減少樣品用量的同時完成基于微珠的全自動DNA純化。
酶聯免疫吸附試驗（ELISA）是一種廣泛應用在測定液體樣本中的蛋白、抗體或激素的免疫分析技術。ELISA的標準程序通常是把蛋白、抗體或抗原直接或是以捕捉抗體固定在固相載體上，再加入一級檢測抗體，形成一個抗原抗體的復合物。如果該抗體已經用酶標記了，即可用來直接測定抗原的量，若沒有，則利用另一個酶標記的二級抗體來測定抗原的量。測定抗原量的方法是加入該酶的底物，作用后產生出現的顏色深淺和樣本中的抗原量呈正比的關系，依此原理計算出樣本中的抗原總量或濃度。
圖1. ELISA 檢測流程（圖片來源于網絡）
影響ELISA數據質量最重要的因素是背景信號和變異系數（CV），而這兩個因素在很大程度上都受到實驗過程中清洗效率的影響。因為蛋白質或抗體會產生非特異性背景信號，清洗步驟可以去除未結合和非特異性結合的蛋白質或抗體。通常所有ELISA在每個反應后都會有多個洗滌步驟，因此，清洗步驟的優化和自動化不僅可以減少工作流程的時間和成本，還可以提高數據質量。二、C.WASH非接觸式微孔板樣品處理系統
C.WASH非接觸式微孔板樣品處理系統是一種非接觸式洗板機和分液設備的組合，它采用獨特的反向離心技術可以快速且可重復地去除96、384和1536孔板上殘留量非常低的液體，能夠全自動完成ELISA檢測中的所有清洗步驟。
圖2. C.WASH 非接觸式微孔板樣品處理系統
相比傳統吸液式洗板機和傳統手工拍板，C.WASH非接觸式微孔板樣品處理系統有以下優勢：
1. 清洗效果優異
使用C.WASH 進行清洗后，每個微孔的殘留體積< 0.1uL，降低背景信號，輕松提升信噪比，因此可以提高實驗的穩定性和成功率。并且信噪比的顯著提升可以帶來整體實驗體積的縮小，減少試劑的使用量，降低實驗成本。
2. 清洗方式更加科學
采用非接觸式注液，反向離心方式移除清洗，杜絕傳統Tip-based washer引起的交叉污染問題，也可避免傳統方法對板底細胞的損傷。
3. 快速、自動化
數秒即可自動去除整個96孔板、384孔板和1536孔板上的液體，有效節省時間，從而縮短整體項目周期。
4. 操作簡單
操作軟件設計直觀，提供快速訪問選項卡，有效提升效率。基于SiLA2 接口的完善通信支持與API集成，能夠與第三方控制軟件相兼容。
圖3. C.WASH優化ELISA中的清洗過程
三、ELISA實驗使用C.WASH清洗案例
THP-1是一種來源于急性單核細胞白血病患者的懸浮細胞系，通常用作人類單核細胞的細胞系模型。加入PMA后，單核細胞分化為具有巨噬細胞樣特征的粘附細胞。用脂多糖（LPS）處理活化的THP1細胞可以模擬細菌感染并誘導促炎基因的表達。活化巨噬細胞信號級聯中最早的細胞因子之一是TNF-α，這種細胞因子參與幾乎所有的炎癥反應，并調節免疫細胞的活動。
圖4. ELISA 工作流程
本次實驗使用商用ELISA試劑盒量化分泌到受刺激的THP-1細胞培養上清中的TNF-α的量，完整的工作流程如圖4所示，在所有試劑添加之間，使用C.WASH非接觸式微孔板樣品處理系統或手動清洗微孔板。
實驗結果一：C.WASH與手動清洗效果相當
使用ELISA檢測細胞培養上清液（A）和兩種不同濃度的TNF-α標準品（B和C）的TNF-α濃度，并對ABC三種情況分析了微孔板上的16個孔（A-P）。ELISA結果顯示，使用C.WASH自動清洗與手動清洗產生的TNF-α濃度非常相似，如圖5所示。圖6顯示了手動清洗和C.WASH清洗的校準曲線，兩條曲線具有可比性，R2值為0999。
圖5.手動清洗（藍色）和C.WASH（綠色）清洗測量TNF-α濃度結果
圖6. 兩種清洗方案TNF-α標準溶液的校準曲線（手動清洗為藍色，C.WASH清洗為綠色），所示數據為三次測量得出的平均值。
實驗結果二：C.WASH節省耗材
C.WASH的所有清洗步驟均在不使用任何槍頭的情況下進行，假設每個孔使用一個槍頭手動移除試劑/洗滌緩沖液，并且每次加清洗緩沖液時使用一組12個槍頭，每次清洗總計396個槍頭，一個384孔板的完整ELISA實驗手動清洗總計需要5940個槍頭，而C.WASH則在整個清洗過程中不需要使用一個槍頭（表1）。
表1. 兩種方案中時間和移液槍頭消耗比較
實驗結果三：快速且自動化
對于一個完整的384孔板，C.WASH一個清洗周期為40s，而手動去除液體，時間包括輕敲以確保低殘留量以及手動添加新的清洗液洗，至少慢4倍（約3分鐘）。清洗步驟節省的時間與15個清洗周期相乘，C.WASH自動洗板的總時間大幅減少，整個ELISA實驗只需要10分鐘時間，手動清洗則需要大概45分鐘（表1）。
總之，C.WASH清洗與傳統手動方法相比，減少了執行ELISA清洗步驟所需的時間和成本，并且通過自動化清洗步驟，可實現更高的再現性和一致的數據質量。
四、C.WASH 的其他應用領域
C. WASH非接觸式微孔板樣品處理系統不僅可以應用于ELISA分析，基于其創新的清洗方式，還可以在其他領域發揮出重要作用：
✔ 細胞實驗：通過降低背景值和變異系數，可以改善數據質量并提升細胞檢測中的 z 值。
✔ 高通量篩選：提供完善的API，確保只需很少的維護，可與全自動工作流程無縫集成。
✔ 面向下一代測序的DNA純化：在NGS文庫制備工作流程中，能夠在減少樣品用量的同時完成基于微珠的全自動DNA純化。
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