單細胞轉(zhuǎn)錄組測序技術(shù)的普及,為生命科學的研究提供了全新的手段。基于高通量單細胞轉(zhuǎn)錄組測序,既能發(fā)現(xiàn)特定組織中可能的細胞類型,也能了解不同細胞組成上的差別,更能通過基因表達圖譜,剖析不同細胞的基因特征,為理解細胞的功能提供了數(shù)據(jù)支持。但是,單細胞研究并沒有想象中的那么簡單,從細胞解離,數(shù)據(jù)分析,到數(shù)據(jù)解讀,只有把每一步都做好了,才有可能有好的成果產(chǎn)出。
在這個過程中,最最重要的是,單細胞數(shù)據(jù)中到底能識別到哪些細胞類型?這是整個單細胞數(shù)據(jù)挖掘的起點,也是決定整個單細胞故事的關(guān)鍵,怎么能把這個過程做好呢?

首先,我們要大概知道做的單細胞測序的樣本,可能存在哪些細胞類型,如腫瘤里可能有惡性細胞,上皮細胞,免疫細胞等。其次,這些可能在數(shù)據(jù)里出現(xiàn)的細胞類型,有哪些標準的、業(yè)界公認的marker呢?
01 整理收集實驗室前期的研究基礎相信各位研究某個具體領(lǐng)域的老師們,自己對該單細胞實驗的樣本還是比較了解的。作為課題組研究方向的實驗材料,經(jīng)過多年的研究和積累,該組織中可能存在哪類主要類型的細胞,它們的標志性marker有幾個,是哪幾個,還是爛熟于心。因此,只需把這些細胞類型和對應的marker整理出來,結(jié)合單細胞分群數(shù)據(jù)的marker表進行匹配,就能知道自己做的樣本中存在哪些類型。當然,這個過程中可能會出現(xiàn)一種情況:用已知的marker進行匹配后,大部分的細胞類型都找到了,但是有些細胞類型,無論用哪種marker,都匹配不上。這時,大家無需焦慮和擔心,應該高興。因為您有可能發(fā)現(xiàn)了一種新的細胞亞型,一類之前大家從來沒發(fā)現(xiàn)過的,可能具有重要生物學功能的細胞類型。
02 查閱文獻整理相關(guān)細胞類型marker文獻是所有科學研究成果的最終展示形式。因此,調(diào)研本研究領(lǐng)域最新的研究進展,特別是單細胞測序相關(guān)最新的文章。在這些文章中有哪些細胞類型?哪些細胞是用哪些基因進行分類的?這個過程中,可能也會遇到一些問題,比如:同樣的組織的單細胞文章,同一個細胞類型,不同文章會用到不同的marker。這種情況下,建議把這些marker都收集下來。同時,也要多研究下,該文章為什么用這個?參考來源是什么?
03 通過相關(guān)數(shù)據(jù)庫找到特定細胞類型的marker由于單細胞技術(shù)的發(fā)展,科學家們已經(jīng)對大部分的組織類型進行了研究。因此,很多專門的數(shù)據(jù)庫對不同的組織類型,細胞類型,對應發(fā)現(xiàn)的marker進行整理,常見的marker數(shù)據(jù)庫如下:
Cellmarker:http://bio-bigdata.hrbmu.edu.cn/CellMarker/HCA:https://www.humancellatlas.org/CancerSEA:http://biocc.hrbmu.edu.cn/CancerSEA/
通過以上幾種方式,基本可以拿到常規(guī)的組織樣本中的細胞marker信息,基于此對自己的單細胞數(shù)據(jù)進行匹配分析,我們就能知道自己的組織中有哪些具體的細胞類型,各自占比多少。進一步通過更加深入的亞群分析,組間比較和功能挖掘,一篇不錯的單細胞文章就出來了。
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