6月22日，NMPA公示，復興凱特CD19靶點自體CAR-T細胞治療產品阿基侖賽注射液正式獲批，這意味著我國迎來首款獲批上市的CAR-T細胞治療產品。

Insight數據庫顯示，目前有20多家企業布局“重押”CAR-T療法，包括藥明巨諾、科濟制藥、傳奇生物、上海優卡迪生物、恒潤達生生物、馴鹿醫療等，已進入臨床階段的項目36個，但CAR-T療法布局的靶點主要聚焦在CD19、BCMA，CAR-T靶點同質化程度較為嚴重，如何在細胞療法CAR-T靶點同質化激烈競爭的格局中突圍呢？

今天，我們就來聊聊CAR-T細胞療法的“姊妹“—NK細胞免疫療法。

NK細胞可非特異性直接殺傷腫瘤細胞，這種天然殺傷活性無MHC限制，不依賴抗體，也不需要抗原致敏，NK細胞還具有很強的免疫調節功能，與機體其他多種免疫細胞相互作用，調節機體的免疫狀態和免疫功能。NK細胞療法作為一種可行的治療策略，逐漸成為僅次于T細胞療法的免疫新星。
 

NK細胞的抗腫瘤途徑

NK細胞與T細胞、B細胞不同，NK細胞不需要特異性的抗原致敏刺激就可識別并殺傷靶細胞。可通過多種途徑抑制腫瘤細胞的生長和擴散：

1）在腫瘤微環境趨化因子和黏附因子的引導下，NK細胞募集到腫瘤發生的部位，促使腫瘤組織中NK細胞浸潤程度增加，使得NK細胞表面活化受體識別腫瘤細胞表面相應配體，釋放穿孔素、顆粒酶等殺傷介質，直接殺傷腫瘤細胞；

2）活化的NK細胞可表達死亡誘導配體-Fas配體（FASLG，又稱 TNFSF6），可與腫瘤壞死因子相關誘導凋亡配體（TNF related apoptosis inducing ligand，TRAIL）結合，誘導腫瘤細胞凋亡；

3）通過抗體依賴性細胞介導的細胞毒作用（antibody dependent cell-mediated cytotoxicity，ADCC），NK細胞通過細胞表面的FcγRIII（CD16）和腫瘤抗原特異性抗體Fc段結合，識別并殺傷腫瘤細胞；

4）NK細胞通過產生細胞因子（IFNγ、TNFα、IL1、IL10、GM-CSF等）和趨化因子（CCL3、CCL4）將其他免疫細胞募集到炎癥部位，誘導其活化，并增殖產生固有和適應性免疫應答。
 

圖1|NK 細胞（黃色部分）攻擊腫瘤細胞（紅色部分）[1]

NK細胞的來源
目前治療性NK細胞的來源比較廣泛，包括自體NK細胞和替代性NK細胞，后者包括臍帶血NK細胞、干細胞來源的NK細胞、細胞因子誘導的記憶樣NK細胞和嵌合抗原受體（CAR）-NK細胞。由于細胞的分離、轉導和擴增過程中面臨的挑戰，原代NK細胞并不是產生CAR細胞產物的理想原料。因此，CAR-NK細胞的臨床試驗目前主要集中于干細胞或祖細胞來源的產品上。

同立海源生物自主研發的AMMS®NK細胞培養試劑盒套裝，國內首款通過美國FDA DMF II類備案，備案號DMF 035588。該款試劑盒采用自體外周血或臍血細胞中分離得到的單個核細胞，經體外操作使NK細胞活化擴增，最終得到高純度高效應的NK細胞。經過大量的測試數據表明，該款試劑盒處于國內領先地位。

NK細胞免疫療法

目前，NK細胞抗腫瘤的研究正在如火如荼地開展，主要包括：

1）針對NK細胞抑制型或激活型受體的單克隆抗體(monoclonal antibody，mAb)；

2）聯合NK細胞和單抗藥（如免疫檢查點抑制劑、免疫因子）來誘導抗體特異的細胞毒性；

3）NK細胞過繼性免疫療法。
 

圖2| NK細胞的活化受體、抑制受體及其功能和配體[2]
 

NK細胞的下方顯示NK細胞的細胞因子和相應的細胞因子受體。抑制受體（紅色）與相應的配體（括號中）顯示在NK細胞的左側，活化受體（綠色）與相應的配體（括號中）顯示在NK細胞的右側，NK細胞上的LFA-1（藍色）與靶細胞上的ICAM-1結合，將向靶細胞釋放顆粒酶，這是有效裂解靶細胞所必需的。

1）靶向NK細胞的單克隆抗體
NK細胞對腫瘤的識別主要依賴于其表達的多種激活受體和抑制受體，兩者間的平衡決定著NK細胞的殺傷作用。

NK細胞表面的激活受體包括NKG2D（也稱為 CD314 和 KLRK1）、DNAM-1（也稱為 CD226）、天然細胞毒性受體 (NCRs)、FcγRIII （CD16）等，這些激活受體結合配體后，能引發細胞因子如IFN-γ、TNF-α的分泌。以NK細胞表面活化受體CD16/NKG2D為靶點的雙特異性分子、TAA/CD16/NKG2D、TAA/CD16/NKp46三特異性抗體等，可以靶向NK細胞識別并殺傷腫瘤細胞。

NK細胞表面的抑制受體包括NKG2A/CD94、TIGIT、PD1、KIR2DL1/2/3等，與MHC-I類分子結合，可抑制NK細胞活化，如在研人源化抗抑制受體單克隆抗體IPH2101。

2）基于免疫檢查點抑制劑、細胞因子的免疫療法
NK細胞作為殺傷腫瘤細胞的免疫武器，需要找到腫瘤細胞才能夠發揮作用。腫瘤細胞表面表達的應激蛋白是NK細胞的識別標記，但腫瘤細胞會通過蛋白脫落躲避免疫系統的監視，主要是MICA和MICB兩類蛋白，免疫檢查點抑制劑，可解除NK細胞的抑制信號，靶向MICA 和 MICB的抗體可增加癌細胞表面MICA 和MICB的水平，讓NK細胞能夠有效識別腫瘤。免疫檢查點抑制劑還包括T細胞免疫球蛋白粘蛋白受體3（TIM-3）、淋巴細胞激活基因3（LAG-3）。基于細胞因子的免疫療法主要包括IL-2療法、IL-15療法和TGF-β抑制劑。

眾所周知，IL-2可以誘導NK細胞的增殖，提高其溶細胞活性，基于IL-2的免疫療法已被批準用于治療一小部分轉移性腎細胞癌、黑色素瘤以及急性髓細胞性白血病患者。在靶向NK細胞方面，IL-15可能比IL-2更具優勢。IL-15可以擴增NK細胞群并增加NK細胞活化受體的表達，而不誘導Treg細胞群的擴增。TGF-β是機體內一個能調節細胞生長和分化等多種生物學效應的重要家族，其Ι型和Ⅱ型受體是一類絲氨酸/蘇氨酸激酶糖蛋白。Ι型TGF-β受體抑制劑Galunisertib對AML和結腸癌均有效，其能促進NK細胞上NKG2D表達的恢復，以及TNF、IFN-γ的釋放。

3）NK細胞過繼性免疫療法
NK細胞過繼性免疫療法是細胞生物治療方法之一，通過向腫瘤患者回輸經體外誘導培養的NK細胞，使其在機體中發揮直接或間接殺傷腫瘤細胞的作用，從而達到治療腫瘤的目的。目前主要包括自體NK細胞輸注、同種異體NK細胞輸注和CAR-NK細胞療法。

CAR-NK即通過基因工程修飾，在NK細胞表面表達能夠和腫瘤特異性抗原結合的CAR，回輸后能夠特異性識別帶有特定抗原的腫瘤細胞，引發免疫反應從而達到清除腫瘤細胞的目的。血液腫瘤特異性靶點包括CD19、CD20、CD33、CD138、CS-1、CD-5、EBNA3C等，實體瘤特異性靶點包括HER2、GD2、PSCA和EGFRvIII等。
 

表1|部分正在進行的治療性NK細胞產品的臨床試驗[3]

 

表2| 部分NK細胞銜接器和NK細胞定向細胞因子療法臨床試驗[3]

NK細胞療法近5年融資大事件

隨著NK細胞療法臨床價值的凸顯，無論是生物技術初創公司還是制藥巨頭，紛紛布局NK細胞療法賽道，想了解NK細胞免疫療法在研企業的小伙伴，點擊這里。據不完全統計，近年來國內外NK細胞領域交易額累計達到50億美元。從資本動態來看，多數NK細胞療法企業的融資處于種子輪到B輪之間。無論是產品臨床研究還是資本支持，NK細胞療法都有很大的上升空間。相對于擁擠火熱的T細胞療法賽道，NK細胞療法正處方興未艾的階段，隨著基礎研究的深入和資本的持續助力，NK細胞療法將是一個面向百億藍海市場的朝陽產業。
 

表3|近5年NK細胞療法合作、融資大事件

小結：
NK細胞作為固有免疫中重要的效應細胞，具有強大的抗腫瘤功能，基于NK細胞的免疫療法研究也正如火如荼地展開，隨著對NK細胞的分子特征和功能的進一步探索，基于NK細胞靶向免疫治療將成為腫瘤免疫治療的新突破。

參考文獻：

[1] Mitch Leslie. Engineered natural killer cells may be the next great cancer immunotherapy. Secience. 2018. doi:10.1126/science.aav4154.

[2]  Carlsten M, Järås M. Natural Killer Cells in Myeloid Malignancies: Immune Surveillance, NK Cell Dysfunction, and Pharmacological Opportunities to Bolster the Endogenous NK Cells. Front Immunol. 2019 Oct 11;10:2357. 

doi: 10.3389/fimmu.2019.02357.

[3]  Myers, J.A., Miller, J.S. Exploring the NK cell platform for cancer immunotherapy. Nat Rev Clin Oncol. 18, 85–100 (2021). https://doi.org/10.1038/s41571-020-0426-7.

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