隨著益生菌相關前沿研究快速發展，人們生活水平顯著提升，益生菌消費市場發展速度極快。實現益生菌快速精準計數，對于增長迅速的益生菌市場需求，嚴格監控益生菌產品質量，贏得消費者信任，至關重要。
 

近日杜邦美國威斯康星州的麥迪遜工廠營養與生物科技業務部發表益生菌精準計數前沿技術研究成果[1]。

傳統益生菌計數方式為平板計數法。相對來說，該方法由于計數誤差大（CV：15-35%），培養周期長（2-3天），耗費人力多等問題，已很難滿足益生菌類產品質量監控等分析計數需求。益生菌全球標桿企業—杜邦公司，近日發表的分析數據顯示，相對平板技術法，流式分析法和數字PCR法（ddPCR）可以更快更穩定精準地完成益生菌計數分析（包括總菌，活菌和死菌計數分析），這兩種方法均可在幾小時內完成大量益生菌計數分析（圖1和2），并且計數穩定性有顯著改善，針對不同菌種大量數據分析顯示，這兩種計數方法變異系數基本可控制在5%以內。其中，分析單個樣品速度更快（<3min/樣品）的流式分析益生菌方案，采用英國Apogee Flow公司專注納米顆粒分析的Apogee納米流式來完成相關分析工作，已在杜邦公司全球實驗室成熟運行多年，也為益生菌相關流式分析ISO標準建立做出了積極貢獻。而此次文章提出的ddPCR分析法，則進一步補充了益生菌精準計數，特異菌種精準分析的相關方案。

杜邦營養與健康事業部是全球益生菌科技、研究和生產的領導者，提供最廣泛的具有臨床文獻支持的菌株及益生菌菌產品組合。杜邦公司此次發表的益生菌前沿精準分析相關方案，不僅再一次顯示出杜邦公司在益生菌生產研究方面的領導地位，更是為行業內益生菌快速精準計數分析提供了重要參考方案。
 

圖1，平板計數法，流式分析法，ddPCR法簡要分析流程


圖2，A平板計數法，B ddPCR法，C流式分析法代表數據



圖3，益生菌不同計數方法，變異系數對比數據

Apogee Flow納米流式專注納米顆粒精準分析，憑借極佳的70nm散射光靈敏度，極高的10nm分辨率，精準穩定的絕對計數，多色熒光標記以及高通量自動上樣等，在納米顆粒及益生菌等小顆粒分析方面處于領導地位。在微生物小顆粒分析方面，不僅為杜邦公司全球實驗室提供益生菌快速精準分析方案，同樣可為致病微生物，食品微生物，微生物菌群多樣性等微生物分析工作提供快速精準分析方案，如美國FDA將其應用于致病微生物快速精準分析[2]，中國計量科學研究院將其應用于奶制品致病菌快速精準分析[3]。 

參考資料：

1，Hansen S J Z, Tang P, Kiefer A, et al. Droplet digital PCR is an improved alternative method for high-quality enumeration of viable probiotic strains[J]. Frontiers in Microbiology, 2020, 10: 3025.

2，Williams A J, Cooper W M, Ramsaroop S, et al. Rapid Flow Cytometry Detection of a Single Viable Escherichia coli O157: H7 Cell in Raw Spinach Using a Simplified Sample Preparation Technique[J]. Frontiers in Microbiology, 2017, 8: 1493

3，Wang B, Liu S, Sui Z, et al. Rapid Flow Cytometric Detection of Single Viable Salmonella Cells in Milk Powder[J]. Foodborne Pathogens and Disease, 2020.

4，http://www.bio-gene.com.cn/NewsView.asp?id=3016

 

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