腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶測定原理

AGP催化的逆向反應生成GP，在反應體系中添加的磷酸己糖變位酶和6-磷酸葡萄糖脫氫酶依次催化生成6-磷酸葡萄糖酸和NADPH，340nm下測定NADPH增加速率，即可計算AGP活性。

需自備的的儀器和用品

紫外分光光度計、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、 mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水

試劑的組成和配制

提取液：液體30mL×瓶，4℃保存;

試劑一：液體0mL×瓶，4℃保存；

試劑二：粉劑×支，4℃保存；臨用前加入250μL雙蒸水充分溶解備用；用不完的試劑仍4℃保存；

試劑三：粉劑×瓶，4℃保存；臨用前加入2mL雙蒸水充分溶解備用；用不完的試劑仍4℃保存；

試劑四：粉劑×瓶，4℃保存；臨用前加入3mL雙蒸水充分溶解備用；用不完的試劑仍4℃保存；

試劑五：粉劑×瓶，-20℃保存；臨用前加入3mL雙蒸水充分溶解備用；用不完的試劑仍-20℃保存；

試劑六：粉劑×支，-20℃保存；臨用前加入250μL雙蒸水充分溶解備用；用不完的試劑4℃保存；

試劑七：粉劑×支，-20℃保存；臨用前加入250μL雙蒸水充分溶解備用；用不完的試劑4℃保存；

粗酶液制備

稱取約0.g組織加入mL提取液，冰浴中勻漿。0000g ，4℃離心0min，取上清，置冰上待測。AGP活性計算

、按樣本蛋白濃度計算：

單位的定義：每mg組織蛋白在反應體系中每分鐘催化產生nmol NADPH定義為一個酶活性單位。

AGP活性（U/mg prot）＝反應總體積（700μL ）÷樣本體積（20μL ）÷反應時間(2min)÷NADPH消光系數（6.22×0-3）×ΔA÷蛋白質濃度（mg/mL）=283×ΔA÷蛋白質濃度（mg/mL）。

此法需要自行測定粗酶液蛋白質濃度。

2、按照樣本鮮重計算

單位的定義：每g組織在反應體系中每分鐘催化產生nmol NADPH定義為一個酶活力單位。

AGP活性（U/g 鮮重）=反應總體積（700μL ）÷樣本體積（20μL ）÷反應時間(2min)÷NADPH消光系數（6.22×0-3）×ΔA ÷樣本鮮重(g/mL) =283×ΔA÷樣本鮮重(g/mL)