宿主殘留蛋白HCP ELISA抗體覆蓋率檢測的應用
現(xiàn)今許多生物藥物（抗體、疫苗、重組蛋白等）的制備還是通過生物體系合成，諸如非洲綠猴腎細胞(Vero細胞)和中國倉鼠卵巢(CHO)細胞，大腸桿菌等，這些細胞稱為宿主細胞。盡管已經(jīng)采用多種純化方式，但是在生物藥物中還是可能會有微量的宿主蛋白殘留（HCP）。由于HCP殘留可能對生物藥物的安全性和藥效性能產(chǎn)生一定影響，因此，精準的HCP檢測對于控制生物藥物的質量和安全尤為重要。如：
目前，檢測HCP應用最廣泛、最有實用價值的方法就是采用ELISA方法，它檢測的是總HCP組分，重復性好，靈敏度高，便于設定檢測限度和建立技術規(guī)范。但是ELISA方法檢測也有一定的局限性，比如HCP成分不一，每一種蛋白成分含量也不一致，作為免疫原產(chǎn)生抗體的能力也不相同，所以由此制備的抗HCP抗體并不能完全檢測HCP中所有成分，因此會有“漏檢”，所以需要評估HCP ELISA抗體的覆蓋率（Coverage）。
HCP ELISA抗體覆蓋率的評估方法一般會采用雙向電泳（two-dimensional electrophoresis,2-DE）和蛋白質免疫印跡（Western Blot，WB）技術結合的辦法。將分別得到的HCP總蛋白分離圖像和HCP抗體結合的圖像放在一起疊加、匹配膠點、分別記錄匹配和未匹配的膠點數(shù)量，計算覆蓋率結果。現(xiàn)在還會使用2D-DIGE技術進行HCP抗體覆蓋率的檢測，例如使用cy3標記總蛋白，使用cy5標記的anti-HCP的二抗，這樣最后可以最后一起檢測，不用跑兩塊膠，節(jié)省時間和試劑花費成本等。
美國Azure公司的 Sapphire™ 雙模式多光譜激光成像系統(tǒng)，專業(yè)技術，帶來高質量檢測結果。配有四激光，RGB三色激光即可進行2D和2D-DIGE的檢測，大平臺，檢測更順暢，儀器可進行分辨率，激光強度，聚焦深度的設置，特別是聚焦，采用激光共聚焦光路，減少樣品表面灰塵等的干擾，提高信噪比，檢測更靈敏。
除了上面的應用，sapphire還可檢測多種樣品類型-包括膜/PAGE膠/同位素標記樣品/瓊脂糖凝膠/培養(yǎng)皿/96孔板/微陣列芯片/組織切片等等。
目前，檢測HCP應用最廣泛、最有實用價值的方法就是采用ELISA方法，它檢測的是總HCP組分，重復性好，靈敏度高，便于設定檢測限度和建立技術規(guī)范。但是ELISA方法檢測也有一定的局限性，比如HCP成分不一，每一種蛋白成分含量也不一致，作為免疫原產(chǎn)生抗體的能力也不相同，所以由此制備的抗HCP抗體并不能完全檢測HCP中所有成分，因此會有“漏檢”，所以需要評估HCP ELISA抗體的覆蓋率（Coverage）。HCP ELISA抗體覆蓋率的評估方法一般會采用雙向電泳（two-dimensional electrophoresis,2-DE）和蛋白質免疫印跡（Western Blot，WB）技術結合的辦法。將分別得到的HCP總蛋白分離圖像和HCP抗體結合的圖像放在一起疊加、匹配膠點、分別記錄匹配和未匹配的膠點數(shù)量，計算覆蓋率結果。現(xiàn)在還會使用2D-DIGE技術進行HCP抗體覆蓋率的檢測，例如使用cy3標記總蛋白，使用cy5標記的anti-HCP的二抗，這樣最后可以最后一起檢測，不用跑兩塊膠，節(jié)省時間和試劑花費成本等。除了上面的應用，sapphire還可檢測多種樣品類型-包括膜/PAGE膠/同位素標記樣品/瓊脂糖凝膠/培養(yǎng)皿/96孔板/微陣列芯片/組織切片等等。
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