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細胞消化知識你知道多少?

瀏覽次數:3842 發布日期:2018-9-18  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負

無論是原代細胞還是細胞系或癌細胞,細胞長滿瓶后,需要對細胞進行傳代或將細胞收集起來用作其他實驗。貼壁生長的細胞必須要做的一步便是消化過程,下面便對細胞消化、中和、洗滌等過程做個簡單介紹。

sciencell胰酶消化液

 

1、絕大部分細胞消化的時候是只需用胰酶潤洗一遍即可,吸去胰酶后,殘留胰酶附著在細胞表面在37度一般不到2min足夠消化細胞(絕大部分1min不到)。對于這些細胞原則上不要用胰酶孵育細胞,這樣連續傳代,對細胞傷害很大。簡單的程序是PBS潤洗吸去,胰酶潤洗吸去,然后37度消化。

 

2、什么算是消化好了呢?

不是細胞全部成間隔分布很離散的單個圓形才算消化好了,一般肉眼觀察貼壁細胞層,只要能移動了,多半呈沙狀移動,其實已經可以了,很多人喜歡把細胞消化或者吹打成完全分離細胞,這是沒有必要的。一般能移動了,就應該停止消化,不要等到看到鏡下所有細胞都分離得非常好,間隙很大,才停止。細胞就是完全成單個細胞懸液,之后在貼壁的過程中仍然會聚集,這個是貼壁培養的細胞,尤其是腫瘤細胞的一個特性。細胞只要能從基質上脫離下來,這個時候即使是成片的,吹打不超過20次后(一般10次即可),成小規模聚集(10個細胞左右),是正常的,不要試圖再去延長消化時間。

 

3、EDTA的作用。

許多人不用胰酶,只用EDTA,或者用trypsin/EDTA聯合作用。這里要明白,trypsin切割細胞外基質的一些負責粘連和附著的蛋白,而EDTA通過螯合Ca2+,作用于Integrin的活性,所以EDTA的作用更加溫和。有的人在trypsin里添加一些EDTA,或者對付特別難消化的細胞,添加多一些EDTA,就是這個道理。一般不要試圖延長消化時間(如果10min還消化不徹底的話),而應該想其它辦法。針對如上情況,美國ScienCell公司專門配制了胰酶濃度為0.25%的trypsin/EDTA消化液(T/E,貨號# 0103)和胰酶濃度為0.05%的trypsin/EDTA消化液(T/E,貨號# 0183)

 

4、PBS洗滌。

消化之前用PBS洗滌,是常見的操作,因為Serum含有抑制trypsin的蛋白。對于一些難消化的細胞,可以配制不含Ca2+、Mg2+的PBS,因為這些離子也會抑制trypsin的活性。美國ScienCell公司也有配好的不含Ca2+、Mg2+的PBS,即DPBS(貨號#0303)。

 

5、胰酶的中和。

細胞消化完之后,因為殘留的胰酶對細胞有傷害作用,需要將胰酶中和掉,就需要用到胰酶中和液。美國ScienCell的胰酶中和液(TNS,貨號#0113),含有10%的胎牛血清作為胰酶抑制劑和細胞保護劑。電話13683626447

發布者:北京裕恒豐科技有限公司上海分公司
聯系電話:18211009052
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