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人臍靜脈內皮細胞的形態學觀察和鑒定方法

瀏覽次數:3943 發布日期:2018-9-11  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負

人臍靜脈內皮細胞爬片準備:細胞換液后直接在倒置顯微鏡下觀察細胞的形態及生長特征,并作相差攝影,同時進行常規HE染色觀察并攝片。鑒定采用DAB免疫組織化學法,在6孔培養板中放置載玻片,在玻片上植入2ml含有1×106的細胞懸液,待細胞貼壁后,取出載玻片,放入-20℃的冷丙酮中固定30min,用PBS沖洗3次,每次2min,滴加3%H2O2室溫孵育10min,PBS沖洗3次,每次2min,以消除內源性過氧化物酶的活性。滴加兔抗人Ⅷ因子相關抗原多抗工作液,放入濕盒內4℃過夜,同時另一蓋玻片不加一抗作陰性對照。次日,用PBS沖洗3次,每次2min,滴加辣根酶標記的羊抗兔IgG, 37℃孵育30min, 用PBS沖洗3次,每次2min,用DAB底物混合工作液顯色,顯微鏡下觀察,待出現特異性染色后,終止顯色,進行復染,脫水,透明,封片,相差顯微鏡下觀察攝影。

 

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人臍靜脈內皮細胞(Sciencell #8000)的形態學觀察:相差倒置顯微鏡下觀察,人臍靜脈內皮細胞貼壁單層生長,呈短梭狀或鋪路石樣鑲嵌排列,細胞為扁平多角形,邊界清楚,胞漿豐富。胞核清晰可見,為圓形或橢圓形。原代培養細胞,于接種后2h開始貼壁生長,傳代細胞約半小時后即開始貼壁生長。原代細胞一周左右可長滿,傳代細胞生長旺盛,有時可見多核細胞。

Ⅷ因子相關抗原免疫組化鑒定:人臍靜脈內皮細胞(Sciencell #8000)Ⅷ因子相關抗原免疫組化染色可見細胞呈圓形、梭形或多邊形,胞漿內可見棕黃色顆粒,核周密集,而對照組內未見著色。證實培養的細胞為內皮細胞。

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發布者:北京裕恒豐科技有限公司上海分公司
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