轉(zhuǎn)基因玉米品系TC1507核酸檢測(cè)試劑盒使用說明書

瀏覽次數(shù)：3208　發(fā)布日期：2018-5-26　來源：本站　僅供參考，謝絕轉(zhuǎn)載，否則責(zé)任自負(fù)

轉(zhuǎn)基因玉米品系TC1507核酸檢測(cè)試劑盒（PCR-熒光探針法）

◆ 產(chǎn)品說明

轉(zhuǎn)基因檢測(cè)系列可針對(duì)食品、飼料等樣品中轉(zhuǎn)基因成分的特異核酸片段進(jìn)行擴(kuò)增，通過實(shí)時(shí)擴(kuò)增曲線判定結(jié)果。本產(chǎn)品用于轉(zhuǎn)基因玉米品系TC1507的檢測(cè)，檢出限為0.1%。

◆ 產(chǎn)品組成（ 48測(cè)試）

042162M
試劑	含量
A-1507-P	1000μL × 1支
NG-P	100μL × 1支
PG-1507-P	100μL × 1支

◆ 適用儀器

熒光PCR儀（ABI 7500，CFX 96，Mx 3005P，LineGene9600）等PCR擴(kuò)增儀。

◆ 自備耗材和儀器

①滅菌1.5mL或2.0mL離心管；②滅菌0.2mL PCR管或八聯(lián)管；③冰盒；④移液器（11-10μL，10-100μL，100-1000μL）及配套滅菌吸頭；⑤離心機(jī)；⑥渦旋混勻器；⑦金屬浴；⑧均質(zhì)機(jī)、攪拌機(jī)或研缽等研磨器具；⑨電子天平。

◆ 注意事項(xiàng)

1．本試劑檢測(cè)靈敏度高。為了防止污染，實(shí)驗(yàn)要分區(qū)操作。

1）第一區(qū)：試劑準(zhǔn)備區(qū)。

2）第二區(qū)：樣本制備區(qū)。

3）第三區(qū)：擴(kuò)增及產(chǎn)物分析區(qū)。

★ 分區(qū)之間最好進(jìn)行物理性隔離，避免人為因素造成的污染。

2. 實(shí)驗(yàn)過程中穿戴工作服和乳膠手套，使用移液器，試驗(yàn)產(chǎn)生的所有廢棄物及時(shí)處理。

3．嚴(yán)格按照操作步驟操作，試劑配制和加樣等步驟請(qǐng)嚴(yán)格按照說明書要求在冰上操作。

4．反應(yīng)液中的成分對(duì)光敏感，應(yīng)避光保存。試劑使用前要完全解凍，但應(yīng)避免反復(fù)凍融，推薦使用前離心30秒，并按檢測(cè)頻次將反應(yīng)液以適當(dāng)體積分管保存。

5．反應(yīng)結(jié)束后，擴(kuò)增管請(qǐng)置于密封袋內(nèi)丟棄，當(dāng)日清理，開蓋易造成氣溶膠污染，禁止開蓋。

6．不同批號(hào)試劑請(qǐng)勿混合使用，在有效期內(nèi)使用。

◆ 樣品處理

參照《GB/T 19495.3-2004 轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測(cè) 核酸提取純化方法》或其他標(biāo)準(zhǔn)處理樣品，制備的樣本保存待用。

詳細(xì)步驟請(qǐng)按照標(biāo)準(zhǔn)操作或查閱食安通軟件。

◆ 實(shí)驗(yàn)操作

將試劑完全解凍，各組分離心30 s。

1.試劑配制（試劑準(zhǔn)備區(qū)，放置于冰盒中進(jìn)行）：

若有N個(gè)待檢樣品，則參照下表，按照N+2個(gè)數(shù)量計(jì)算反應(yīng)液用量（N個(gè)待檢樣品+1個(gè)陰性對(duì)照+1個(gè)陽(yáng)性對(duì)照），渦旋混勻，離心30 s，分裝于0.2 mL PCR管中。

試劑	使用量
A-1507-P	20×(N+2)μL
反應(yīng)液總體積	20×(N+2)μL

2.模板制備（樣本制備區(qū)）

建議使用配套植物基因組DNA提取系列產(chǎn)品，具體過程詳見產(chǎn)品說明書。

3．添加模板（樣本制備區(qū)，放置于冰盒中進(jìn)行）

在步驟1中已含有反應(yīng)液的PCR管中分別加入5μL模板，順序?yàn)镹G-P、待測(cè)樣品模板、PG-1507-P。渦旋混勻30s，離心1min，立即進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)。

4. 擴(kuò)增反應(yīng)（擴(kuò)增及產(chǎn)物分析區(qū)）

使用熒光定量PCR儀，熒光基團(tuán)選擇FAM，淬滅基團(tuán)選擇TAMRA。

按下列條件設(shè)置擴(kuò)增反應(yīng)：

PCR循環(huán)			熒光收集位點(diǎn)
95℃	10分鐘	1個(gè)循環(huán)	—
95℃	15秒	45個(gè)循環(huán)	—
60℃	1分鐘	45個(gè)循環(huán)	※