伯齊推出納米流式巧選胞外囊泡最佳參考材料解決方案

胞外囊泡做為細胞間通訊的重要媒介，在細胞生理穩態的維持方面和病理發生發展的過程中發揮著重要的作用，正漸漸成為基礎科學和臨床研究的一個主要研究對象。然而針對胞外囊泡的研究，在世界范圍內一直缺乏相對統一的研究標準或大小評估參考材料。在以往的研究報道中，曾有文獻提出使用自然存在的，具有生物特性的參考材材料（如病毒顆粒和脂質體）作為胞外囊泡研究的參考材料。然而，這些材料的各種理化特性與胞外囊泡的生物特性還相距甚遠。
 
近日，芬蘭科學家Valkonen S和其合作者的研究工作，為胞外囊泡參考材料的發掘工作提供了新的思路。研究人員，通過查取文獻和調查問卷（圖1），以及實驗測試，成功找到一種名為Nanoerythrosomes (Nano E)的胞外囊泡參考材料。其中，Nano E是研究人員利用特殊方法破裂紅細胞過程中產生的囊泡。這種Nano E擁有更加接近細胞源性胞外囊泡（如紅細胞自然產生的胞外囊泡eryEVs）的折射率（RI=1.37），更加適合做囊泡大小評估的尺寸(Nano E的大小尺寸絕大多數分布在200nm左右)（圖2），更加適合做熒光標記的特性等特點（圖3）。這項創新性的研究工作，為加快胞外囊泡研究領域建立統一研究體系，促進該領域研究成果的可借鑒性以及臨床應用轉化的進程，奠定了堅實的基礎。

在該項研究成果中，其中一項引人注目的工作是：研究人員利用胞外囊泡分析最常用的流式分析法，借助英國Apogee超靈敏納米流式分析儀A50 Micro，成功完成對Nano E各參數的分析（如在分析熒光標記的過程中，同時監測各Nano E的大小）。這些工作的順利完成，主要歸功于A50-Micro超高的散射光靈敏度（最小檢測80nm的材料）和精細的分辨率（10nm）-克服了傳統流式散射光檢測的限制（檢測下限為500nm，在分析占有絕大部分比例500nm以下囊泡時會面臨極大挑戰）。這種技術優勢，使Apogee A50 Micro不僅是只借助散射光就可精確分析胞外囊泡（100-1000nm）以及相應的參考材料，同時還可為熒光標記檢測提供必不可少的參考信息。因此，Apogee A50 Micro 已被歐洲國家計量研究協會評定為檢測胞外囊泡的最靈敏分析系統。由于傳統流式檢測法，通常借助熒光標記來對進行信息表征屬，同時所分析樣品中難免會有對熒光標記產生非特異干擾的細胞碎片或膜脂類物質，因此，利用熒光標記技術檢測囊泡，如果想獲得精確的實驗數據，借助散射光信息來排除非特異性干擾物質，將變得格外重要。此外，囊泡表面抗原表達豐度和抗原抗體結合效率也會限制胞外囊泡的熒光標記檢測，這也將在很大程度上限制傳統流式的囊泡檢測應用。由此可見，在分析胞外囊泡及相應參考材料的研究體系中，Apogee超靈敏納米流式A50-Micro顯然已經成為最理想的流式分析系統。

圖1，A:研究人員針對各參考微球所做的權重分析統計，其中參考材料的生化組成成分為最受關注 因素。B:最理想的生物參考材料物理生化特性。

圖 2，參考Apogee標準混合微球，用Apogee A50 Micro分析無熒光標記的eryEVs和Nano E。其中縱坐標代表綠色熒光標記強度，橫坐標代表 A50 Micro大角度散射光強度（用于評估樣本的大小）。

圖 3，與eryEVs相比，Nano E更適合做CD235a抗體標記。其中縱坐標代表綠色熒光標記強度，橫坐標代表 A50 Micro收集的大角度散射光強度。

更多詳情請參考：
Valkonen S, Van d P E, B?ing A, et al. Biological reference materials for extracellular vesicle studies. [J]. European Journal of Pharmaceutical Sciences, 2016.

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