紅細胞裂解液（RBC Lysis Buffer,10×）使用說明書
紅細胞裂解液（RBC Lysis Buffer,10×）
簡介
在生物科研領域，經(jīng)常需要去除紅細胞。去除紅細胞的方法有多種，如ACK Lysis Buffer、Tris-氯化銨紅細胞裂解液、Gey＇s Lysis Buffer。紅細胞裂解液（Red Blood Cell Lysis Buffer）是一種從人、鼠或其他哺乳動物等體內(nèi)的組織樣品或血液中裂解并去除無核紅細胞的溶液，其主要有效成分為NH4CI。
RBC Lysis Buffer(10×)配方經(jīng)過優(yōu)化不同于ACK Lysis Buffer，在裂解無核紅細胞的同時幾乎不損傷淋巴細胞（Lymphocyte）或其它有細胞核的細胞。對于裂解、去除有細胞核紅細胞，例如鳥或禽類的紅細胞，效果不佳，裂解類似細胞時，不建議采用。該裂解經(jīng)過濾除菌，為10×的濃縮液，使用1×RBC Lysis Buffer處理過的血液或組織細胞樣品可以用于后續(xù)的細胞培養(yǎng)、細胞融合以及核酸或蛋白的提取及各種常規(guī)的分析和檢測，尤其適用于流式細胞檢測或需要高濃度裂解液的情況。
組成：
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編號 名稱 |
JM0143 |
JM0143 |
Storage |
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RBC Lysis Buffer(10×) |
100ml |
500ml |
4。C |
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使用說明書 |
1份 | ||
自備材料：
- 胰蛋白酶
- 離心機
- PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液
操作步驟（僅供參考）：
注意：絕大多數(shù)情況下，應使用無菌去離子水稀釋RBC Lysis Buffer（10×）至1×使用，流式細胞術除外。
- 組織細胞樣本的常規(guī)操作
- 制備細胞懸液：新鮮組織經(jīng)過胰蛋白酶或膠原酶等消化處理，通過適當方法制備成細胞懸液，離心棄上清。
- 裂解：加入3~5倍細胞沉淀體積的1×RBC Lysis Buffer，輕柔吹打混勻，裂解1~2min。
本操作步驟在4。C條件下操作更佳，亦可在室溫下操作。
- 離心：4。C，400~500g離心5 min，棄紅色上清。本步驟亦可在室溫下操作。
- 如果發(fā)現(xiàn)紅細胞裂解不完全，可以重復上述步驟2和步驟3各一次。
- 洗滌：根據(jù)實驗要求加入適量PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液，輕柔混勻重懸沉淀。4。C，400~500g離心2~3 min，棄上清，該離心步驟亦可在室溫下操作。所加入的PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液的量一般應大于細胞沉淀體積的5倍以上。
- 如有必要，重復上述步驟5一次，共洗滌1~2次。
- 根據(jù)實驗需要用適當溶液重懸細胞沉淀，進行計數(shù)、培養(yǎng)等后續(xù)實驗。
- 組織細胞樣本的快速操作（無需洗滌）
- 制備細胞懸液：新鮮組織經(jīng)胰蛋白酶或膠原酶等消化處理，制備細胞懸液，離心棄上清。
- 裂解：加入細胞5倍細胞沉淀體積的1×RBC Lysis Buffer，輕柔吹打混勻，裂解1~2 min。本操作步驟在4。C條件下操作更佳，亦可在室溫下操作。
- 加入15~20 ml PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液，輕柔混勻。
- 離心：4。C，400~500g離心5 min，棄紅色上清，本離心步驟亦可在室溫下操作。
- 如果發(fā)現(xiàn)紅細胞裂解不完全，可以重復上述步驟2~3各一次。
- 根據(jù)實驗需要用適當溶液重懸細胞沉淀，進行計數(shù)、培養(yǎng)等后續(xù)實驗。
- 血液樣本的常規(guī)操作
- 取新鮮抗凝血，400~500 g離心5 min，棄上清。
- 裂解：加入6~10倍細胞沉淀體積的1×RBC Lysis Buffer，輕柔吹打混勻，裂解1~5min。
本操作步驟在4。C條件下操作更佳，亦可在室溫下操作。（特別提醒：對于鼠的血液，裂解1~2 min已經(jīng)足夠，對于人的外周血，宜延長裂解時間至4~5 min，并且裂解過程中輕輕搖動以促進紅細胞裂解。）
- 離心：4。C，400~500g離心5 min，棄紅色上清，本離心步驟亦可在室溫下操作。
- 如果發(fā)現(xiàn)紅細胞裂解不完全，可以重復上述步驟2和步驟3一次。
- 洗滌：根據(jù)實驗要求加入適量PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液，輕柔混勻重懸沉淀。4。C，400~500g離心2~3 min，棄上清，該離心步驟亦可在室溫下操作。所加入的PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液的量一般應大于細胞沉淀體積的5倍以上。
- 根據(jù)實驗需要用適當溶液重懸細胞沉淀，進行計數(shù)、培養(yǎng)等后續(xù)實驗。
注意：對于微量或少量的血液樣本，可以不用第一步操作，可直接加入10倍血液體積的ACK Lysis Buffer進行第2步操作，并在4。C或室溫裂解4~15 min。對于鼠的血液，裂解4~5 min已經(jīng)足夠，對于人的外周血，宜延長裂解時間至10 min，但通常不宜超過15min，并且裂解過程中宜適當搖動以促進紅細胞裂解。
- 血液樣本的快速操作（無需洗滌）
- 新鮮抗凝血中加入10倍體積的1×RBC Lysis Buffer，輕輕吹打混勻，亦可在室溫下操作。（特別提醒：對于鼠的血液，裂解4~5 min已經(jīng)足夠，對于人的外周血，宜延長裂解時間至10 min，但通常不宜超過15min，并且裂解過程中宜適當搖動以促進紅細胞裂解。）
- 加入20~30 ml PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液，輕柔混勻。
- 如果發(fā)現(xiàn)紅細胞裂解不完全，可以重復上述步驟2和步驟3一次。
- 根據(jù)實驗需要用適當溶液重懸細胞沉淀，進行計數(shù)、培養(yǎng)等后續(xù)實驗。
注意事項：
- 制備細胞懸液時應根據(jù)實驗需要，不一定要制備成單細胞懸液。
- 后續(xù)試驗如果是用于細胞培養(yǎng)，操作過程中應注意無菌操作，盡量在超凈工作臺內(nèi)操作。
- 離心步驟盡量在4。C離心機上操作。
- 常規(guī)步驟與快速步驟的區(qū)別在于：常規(guī)步驟多了一步洗滌過程的離心，可心節(jié)省洗滌液的用量，并且洗滌效果也更好，不需要大體積的離心管；快速步驟少了一次離心過程，洗滌效果也更好，不需要大體積的離心管；快速步驟少了一次離心過程，洗滌效果略差一些，同時需要大體積的離心管。
- 離心洗滌后，通常極微量的紅細胞不會影響后續(xù)的檢測。
- 如果經(jīng)過1×RBC Lysis Buffer處理后的樣品后續(xù)用于總RNA的提取，在處理細胞時不必使用DEPC處理的溶液，即無需在該操作中特意去除RNase。
- 為了您的安全各健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
有效期：12個月有效。
如實驗中遇到相關技術問題，請及時咨詢公司技術人員
