柱離心法純化質(zhì)粒DNA實(shí)驗(yàn)介紹

瀏覽次數(shù)：1666　發(fā)布日期：2015-6-25　來源：上海北諾生物科技有限公司

實(shí)驗(yàn)原理

1. 離心柱結(jié)構(gòu)：特殊硅基質(zhì)吸附材料，特異性吸附DNA，而RNA與蛋白質(zhì)穿過。

在正常情況下，核酸表面覆蓋了一層由水分子組成的親水薄膜，以維持其水溶性。高濃度鹽離子的加入破壞了核酸表面親水薄膜的相對(duì)有序排列，形成了疏水環(huán)境。在此環(huán)境中，核酸與硅膠膜能有效結(jié)合，而蛋白質(zhì)、代謝產(chǎn)物和其他污染物則不能結(jié)合。

2. 堿變性抽提的原理是在pH高于12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，破壞了堿基配對(duì)，導(dǎo)致雙螺旋結(jié)構(gòu)解開而變性，但閉環(huán)的質(zhì)粒DNA鏈由于處于拓?fù)淅p繞狀態(tài)而不能彼此分開。當(dāng)pH調(diào)至中性時(shí)，質(zhì)粒DNA鏈迅速恢復(fù)到原來構(gòu)型，仍保存于溶液中。而變性的染色體DNA不能再復(fù)性，通過離心，隨不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物等一起沉淀下來，使兩者得以分離

實(shí)驗(yàn)試劑

1. 試劑盒自帶溶液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ

2. 漂洗液

3. 結(jié)合緩沖液

4. 洗脫緩沖液

5. TE buffer

實(shí)驗(yàn)設(shè)備

1. 吸附柱

2. 取液槍

3. 離心機(jī)

4. 低壓電泳儀

5. 水平電泳槽

6. 紫外透射儀

實(shí)驗(yàn)材料

帶有質(zhì)粒的大腸桿菌

實(shí)驗(yàn)步驟

1. 培養(yǎng)細(xì)菌：將帶有質(zhì)粒的大腸桿菌接種到1.5-3ml含有相應(yīng)抗生素的液體培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)12～16小時(shí)；