1.用有效方法誘導(dǎo)凋亡；設(shè)一不加誘導(dǎo)的陰性對照。

2.孵育之后收集細(xì)胞并用冷的PBS洗滌。

3.制備1×annexin V 結(jié)合緩沖液：按10次分析的量計(jì)算，加1 mL試劑C到4ml的去離子水中。

4.制備100μg/mL的PI工作液：用45μl 1×annexin V 結(jié)合緩沖液稀釋5μl試劑B，剩余可保存?zhèn)溆谩?

5.再次離心步驟2中收集的細(xì)胞，棄去上清，重懸在1×annexinV 結(jié)合緩沖液。計(jì)數(shù)并用上述緩沖液稀釋至約1 × 106 cells/mL。按每次實(shí)驗(yàn)用量100μl準(zhǔn)備充分。

6.在每100μl細(xì)胞懸液中加入5μl試劑A和1μl步驟4制備的PI工作液。

7. 室溫孵育15min。

8. 孵育結(jié)束，加400μl 1×annexin V 結(jié)合緩沖液，輕輕混勻后置于冰上。

9.盡快對染色細(xì)胞進(jìn)行分析。可用FL1檢測530nm激發(fā)光，F(xiàn)L3檢測>575nm的激發(fā)光。細(xì)胞群將被分為三組：活細(xì)胞顯示弱熒光，凋亡細(xì)胞顯示綠色熒光，而死細(xì)胞則同時(shí)發(fā)紅、綠熒光。

10. 可用熒光顯微鏡驗(yàn)證結(jié)果，適用檢測FITC、TRITC或Texas Red®的濾光片檢測。