試驗不同樣品量、不同研磨鋼珠大小和不同研磨鋼珠數量對新鮮麥苗研磨效果的影響,從而摸索出用TL2020實驗室小型植物粉碎機進行小麥麥苗樣品前處理的最佳實驗方案,為后續有效提取麥苗DNA提供保障。
材料:新鮮小麥麥苗
儀器:主機,TL2020實驗室小型植物粉碎機(又名TL2020高通量組織研磨儀,原理是水平震蕩驅動樣品管內的鋼珠使其與管壁或者樣品發生高頻碰撞摩擦從而實現樣品研磨,和刀片粉碎原理的植物粉碎機相比,更適合需要精細研磨的生物及化學實驗);配件:2ml研磨適配架,直徑1-8mm研磨鋼珠
步驟:
1)取樣:用打孔器在麥苗上取樣20-30片,或用剪刀將麥苗剪成若干小塊;
2)將小塊/小片麥苗放入一系列2ml EP管中(圓底),部分EP管中放入約0.1g, 部分EP管中放入約1g。其中,在0.1g樣品管里分別置入直徑4-8mm的鋼珠(4mm2-3顆/管,5mm1顆/管,8mm1顆/管);而1g樣品管中置入1-3顆4mm的鋼球(此時》5mm直徑鋼球會造成管內擁擠,必然影響研磨效果,故不嘗試);
3)將以上EP管同時放入TL2020實驗室小型植物粉碎機的2ml研磨適配架中,然后將適配架固定在研磨儀的搖臂中;
4)設置TL2020的研磨時間為5分鐘,研磨頻率1800rpm(1800次/分鐘)。
結果:
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圖1:當樣品量過多時(>0.15g),無論置入1個,2個還是3個直徑4mm的鋼珠,其研磨效果均不理想,有較多塊狀組織。 |
圖2:當每個試管的樣品量為《0.1g左右時,無論置入1顆直徑8mm鋼珠,或1顆直徑5mm鋼珠,還是2-3顆直徑4mm鋼珠,均可將麥苗樣品研磨成細泥狀。 |
結論:
研磨管中樣品的數量(重量)對研磨結果至關重要,而研磨珠的大小和數量對研磨結果不是最重要的因素,但大的研磨珠相比小研磨珠的研磨時間會縮短,越小的研磨珠研磨的細度越細。 樣品體積不得大于試管的1/3。
附:0.1g小麥麥苗的實際稱重, 可供參考
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本文關鍵詞:植物粉碎機,小型植物粉碎機,實驗室小型植物粉碎