細胞技術專題：細胞生長曲線實驗
細胞生長曲線是測定細胞絕對生長數的常用方法，是判定細胞活力的重要指標。一般細胞傳代之后，經過短暫的懸浮然后貼壁，隨后度過長短不同的潛伏期，即進入大量分裂的指數生長期。為了準確描述整個過程中細胞數目的動態變化，典型的生長曲線可分為生長緩慢的潛伏期，斜率較大的指數生長期，呈平臺狀的平頂期及退化衰亡4個部分。
實驗方法
- 細胞生長曲線
| 實驗方法原理 | 細胞生長曲線是觀察細胞生長基本規律的重要方法。只有具備自身穩定生長特性的細胞才適合在觀察細胞生長變化的實驗中應用。因而在細胞系細胞和非建系細胞生長特性觀察中，生長曲線的測定是最為基本的指標。細胞生長曲線的測定一般可利用細胞計數法進行。 |
|---|---|
| 實驗材料 |
細胞 |
| 試劑、試劑盒 |
D-Hanks液 牛血清 RPMI1640 雙抗 0.08%胰酶 |
| 儀器、耗材 |
凈化工作臺 離心機 恒溫水浴箱 冰箱 倒置相差顯微鏡 培養箱 吸管 培養瓶 吸頭 槍頭 24培養板 膠塞 微量加樣槍 紅血球計數板 |
| 實驗步驟 |
1. 取生長狀態良好的細胞，采用一般傳代方法進行消化，制成細胞懸液。
2. 計數，精確地將細胞分別接種于21～30個大小一致的培養瓶內或培養孔（以24孔培養板為宜），每瓶或孔細胞總數要求一致，加入培養液的量也要一致。 3. 每天或每隔一天取出3瓶（孔）細胞進行計數，計算均值。培養3～5 d 常要給未計數的細胞換液。 4. 以培養時間為橫軸，細胞數為縱軸（對數），描繪在半對數座標紙上，連接成曲線后即成該細胞的生長曲線。 |
| 注意事項 |
1. 細胞生長曲線雖然最為常用，但有時其反映數值不夠精確，可有20～30%的誤差，需結合其它指標進行分析。
2. 現在很多實驗室利用培養板采用MTT法進行生長曲線測定，較為簡便。 3. 標準的細胞生長曲線近似“S”形，一般在傳代后第一天細胞數有所減少，再經過幾天的潛伏適應期，然后進入對數生長期，達到平臺期后生長穩定，最后到達衰老。 4. 在生長曲線上細胞數量增加1倍時間稱為細胞倍增時間，可以從曲線上換算出。 |
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