細胞技術專題：人臍動脈平滑肌細胞培養實驗
人臍動脈平滑肌細胞培養可以：（1）獲得人臍動脈平滑肌細胞；（2）作為重大動脈疾病的研究底物；（3）研究血管模型；（4）對血管疾病的藥理學和治療繼續提供信息。
實驗方法
- 消化法
- 貼塊法
| 實驗方法原理 | 運用消化法進行人臍動脈血管平滑肌細胞的培養，并用倒置顯微鏡進行形態學觀察和用免疫組化對培養細胞進行鑒定。 |
|---|---|
| 實驗材料 |
臍帶 |
| 試劑、試劑盒 |
膠原酶消化液 胰蛋白酶 膠原酶 彈性蛋白酶 DMEM |
| 儀器、耗材 |
眼科剪 滴管 離心機 培養皿 CO2培養箱 |
| 實驗步驟 |
一、實驗步驟
1. 冰冷無菌D-Hanks’液中漂洗，用眼科剪仔細清除脂肪、包膜、血管等組織，轉入青霉素小瓶中，加入少量無菌D-Hanks’液，用眼科剪剪成0.1-1.0 mm3 大小的碎片。 2. 用滴管輕輕吸出上層細小脂肪碎塊和油滴，再用無菌D-Hanks’液反復清洗8~10 次。
3. 加入 10 倍體積無菌膠原酶消化液(1 mg/mL)，室溫消化30 min，1000 rpm離心 5 min，棄上清，加1 mg/mL胰蛋白酶 37℃消化 20 min，再次離心5 min，棄上清。
4. 加入胰蛋白酶 37℃消化20 min，再次離心5 min，棄上清。
5. 加膠原酶(1 mg/mL)彈性蛋白酶(0.5 mg/mL) 混合消化液 37℃消化 20 min，再離心5 min，棄消化液。
6. 加混合消化液 37℃消化 20 min，再次離心 5 min，細胞加含 10% FBS的DMEM培養基重懸，轉入培養皿 37℃、5% CO2培養箱中培養即可。 |
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