01 細胞轉染概述及應用

細胞轉染是指將外源的基因如DNA、RNA等采用各種化學、生物學或物理方法導入真核細胞的技術。是生物醫學研究的重要工具，廣泛應用于以下方面：

■研究基因功能

通過導入特定研究的目的基因，使目的基因過表達，研究其在細胞中的高表達情況下細胞功能的影響。或者利用siRNA或shRNA使目的基因不表達或者表達降低，研究基因缺失情況下對細胞功能的影響。

■蛋白質表達生產

通過轉染編碼所需目的蛋白的基因，進行蛋白質表達及純化，也可以通過融合熒光蛋白，研究目的蛋白在細胞內的分布或者定位。

■細胞工程

通過轉染和篩選，獲得能夠穩定表達外源基因的細胞系，即構建穩轉細胞株。

■藥物篩選與毒性測試

轉染特定基因，從而驗證藥物靶點的有效性。通過高通量篩選，篩選出潛在藥物。

■基因治療

導入或者修復基因，治療一些遺傳病，也可轉染編碼抗原基因，進行疫苗研發。

02 細胞轉染分類

Part.1
按導入的核酸存在于宿主細胞的時間長短，分為瞬轉和穩轉。

瞬轉：外源基因得以表達但它們并不會整合到宿主細胞的基因組中，隨細胞分裂逐漸丟失。

穩轉：外源基因能夠整合到細胞的基因組中，隨細胞分裂持續表達，使得轉染細胞的子代細胞也同樣表達外源基因。
 

二者區別：

區別	瞬轉	穩轉
目的不同	短時間獲得高水平的基因表達	獲得穩定表達目的基因的細胞株
穩定性不同	瞬時轉染由于基因未整合到染色體體，穩定性較差	由于經過篩選，目的基因整合到染色體中，其穩定性好
方法不同	一般采用脂質體轉染法	一般更偏向于病毒轉染、電轉等方法
篩選過程不同	轉染后一般不需要進行篩選	一般需要經過篩選，挑選出目的基因整合到宿主染色體中的細胞
質粒不同	質粒不需要帶有抗性	一定要帶有特定的抗性以便于后續的克隆株篩選
表達時效不同	目的基因的表達通常持續幾天，不能穩定遺傳	長時間穩定表達目的基因
實驗周期不同	轉染后24h-96h收細胞	2-3周甚至3-4周篩選出穩轉細胞克隆

Part.2

按照方法分為物理介導法、化學介導法，生物介導法。

物理介導法：通過物理的方法（例如電穿孔法、顯微注射法）直接將外源核酸導入到細胞內，一般不需要使用任何化學物質。效率較高，但對細胞損傷大，細胞存活率低。

化學介導法：通過使用一些化學物質，如PEI、脂質體等，來改變細胞膜的物理和化學性質，使其對外源性DNA或RNA具有親和力，從而實現基因轉移。這種方法實驗操作簡單，周期短，但大多數不能長期穩定表達外源基因。

生物介導法：一般利用病毒作為載體，將外源基因包裝后導入細胞，如慢病毒、腺病毒、逆轉錄病毒。這種方法可以實現外源基因的長期穩定表達，也可進行體內、體外高效、特異性的基因轉移。但實驗操作較為繁瑣，實驗周期較其他方法長。

 

 

由此看來，細胞轉染方法多種多樣。選擇哪種轉染方法，取決于實驗需求、實驗室條件、細胞的類型和轉染效率等因素。

目前，大多數實驗室使用較多的主要有化學介導中的脂質體轉染（質粒轉染）和生物介導中的慢病毒轉染法。質粒轉染操作簡單，但有些細胞系不容易轉染，轉染效率低，給實驗帶來很多不便。而病毒轉染具有能夠穩定表達，宿主范圍廣的優勢，且其對非分裂的原代細胞、干細胞等具有較高的轉染效率，同時體內外實驗均有效，同樣適用于體內活體動物實驗，如動物成瘤等。

 
我們尚恩生物公司對常用的細胞系，原代細胞進行慢病毒轉染，包括細胞慢病毒轉染綠色熒光蛋白（ZsGreen）或者紅色熒光蛋白（mCherry、RFP）、細胞慢病毒轉染化學發光LUC、細胞慢病毒SV40永生化轉染，總共近40種穩轉細胞系。也可以進行指定細胞的慢病毒轉染。
 

✔ 慢病毒轉染服務

服務 編號	轉染類別	試驗目標	實驗周期
SNTS-L001	GFP穩轉	獲得GFP穩定表達的細胞	3-4周
SNTS-L002	RFP穩轉	獲得RFP穩定表達的細胞	3-4周
SNTS-L003	mCherry穩轉	獲得mCherry穩定表達的細胞	3-4周
SNTS-L004	LUC穩轉	獲得LUC穩定表達的細胞	3-4周
SNTS-L005	SV40永生	獲得SV40永生化的細胞(以原代細胞為主)	6-8周

武漢尚恩生物簡介：

武漢尚恩生物技術有限公司坐落于武漢東湖高新區光谷生物城，專注于細胞及系列產品的研發、生產和服務，公司建有標準化GMP實驗室、動物房，已通過GB/T19001-2016/ISO9001:2015質量管理體系認證，并獲得高新技術企業等多項榮譽。

公司主要研發生產細胞系、原代細胞、胎牛血清、基礎培養基、完全培養基、輔助試劑等系列產品，提供細胞及培養配套產品一站式采購服務；細胞庫儲存細胞系700余種，同時通過不間斷引種細胞擴大豐富細胞種類；公司還提供人源、小鼠源細胞系的STR鑒定，其他種屬細胞的種屬鑒定服務，細胞標志物檢測，污染檢測等細胞相關實驗服務。

尚恩生物細胞類產品為國內各大高校生物實驗室、醫學院、生物研究機構及相關診斷、制藥公司等提供完善的細胞資源庫和相關配套試劑，公司將不斷追求卓越產品品質為廣大科研工作者提供更優質的產品和服務！尚恩生物 — 您專業的細胞供應商！