外泌體是包含了復(fù)雜RNA和蛋白質(zhì)的小膜泡，是細(xì)胞間信號(hào)傳輸?shù)妮d體。多種細(xì)胞在正常及病理狀態(tài)下均可分泌外泌體，它們廣泛存在于血液、唾液、尿液、腦脊液和乳汁等體液中，參與細(xì)胞間通訊。近年來，外泌體的研究熱度持續(xù)攀升，在2019年國家自然科學(xué)基金獲批項(xiàng)目中，外泌體研究相關(guān)項(xiàng)目的總數(shù)突破500個(gè)，立項(xiàng)的總金額突破2億元。由于外泌體的尺寸很小僅為30~200 nm，目前很少有技術(shù)能夠在單個(gè)外泌體水平同時(shí)提供物理表征和蛋白表型分析。單個(gè)外泌體表征分析是將免疫學(xué)與光學(xué)結(jié)合的一種新技術(shù)。該技術(shù)首先利用免疫識(shí)別將特定的外泌體進(jìn)行捕獲分離，然后再對目標(biāo)外泌體的表面標(biāo)志物及內(nèi)容物（如攜帶的蛋白質(zhì)、RNA、DNA及細(xì)胞因子）進(jìn)行定量分析，從而更加全面地反映外泌體的特性。

作為外泌體表征分析的倡導(dǎo)者，美國NanoView Biosciences于2018年推出了全自動(dòng)外泌體熒光檢測分析系統(tǒng)ExoView，該系統(tǒng)一經(jīng)推出，便引起了外泌體領(lǐng)域科研工作者的廣泛關(guān)注，僅兩年在全球已有100多個(gè)實(shí)驗(yàn)室采用該技術(shù)，發(fā)表文獻(xiàn)近百篇，刊載在Cell, Cell Biology, Journal of Extracellular Vesicles等期刊。基于中國外泌體研究的快速發(fā)展，Quantum Design中國在北京建立了專業(yè)的客戶服務(wù)中心，正式推出ExoView®外泌體全面表征試劑盒測試服務(wù)，只需要少量樣品即可一次完成外泌體計(jì)數(shù)、粒徑、蛋白表達(dá)、蛋白共定位、亞群分布的分析。

ExoView®外泌體全面表征試劑盒可對細(xì)胞培養(yǎng)上清、血漿、血清、尿液、腦脊液、唾液等生物樣本中的外泌體直接進(jìn)行分析，僅需50 µl稀釋樣本。試劑盒的捕獲抗體為anti-CD81, anti-CD9, anti-CD63, 同型 IgG 對照，也可自定義。此外，試劑盒的熒光抗體分為CD9（Blue）、CD81（Green）、 CD63（Red）。

ExoView®外泌體全面表征試劑盒的優(yōu)勢包括：

• 特異性捕獲：芯片上可包被多達(dá)6 種捕獲抗體，特異性捕獲含特定蛋白標(biāo)記物的外泌體。

• 絕對陽性外泌體計(jì)數(shù)：芯片捕獲外泌體后，可通過單粒子干涉反射成像傳感器（SP-IRIS）技術(shù)直接檢測樣品中外泌體的數(shù)量。

• 單個(gè)外泌體蛋白共定位分析：檢測每個(gè)外泌體的熒光信號(hào)并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，可獲得熒光共定位信息，用于分析樣品中不同表型外泌體的比例。

• 無需純化：使用抗體捕獲模式，防止樣品中雜質(zhì)影響結(jié)果，可直接檢測血液、尿液和細(xì)胞培養(yǎng)液中的外泌體，未純化樣品的測量結(jié)果與純化后基本一致。

• 粒徑分辨率高：高精度SP-IRIS技術(shù)，可檢測≥50 nm的外泌體，測量結(jié)果與電子顯微鏡檢測結(jié)果基本一致，并統(tǒng)計(jì)生成外泌體的粒徑分布結(jié)果。

• 可檢測外泌體內(nèi)容物：試劑盒配套相應(yīng)的穿膜劑，可穿透外泌體并對外泌體內(nèi)容物進(jìn)行染色并檢測，如下圖所示，Non-permeabilized時(shí)只能檢測到跨膜蛋白CD9的熒光信號(hào)， Permeabilized后即可檢測到外泌體內(nèi)容物（如PD-L1、P-tau等）的表達(dá)。

檢測流程：

試劑盒檢測結(jié)果示例：

• 不同外泌體亞群數(shù)量統(tǒng)計(jì)

• 外泌體粒徑檢測

• 熒光共定位分析

• 單個(gè)外泌體成像圖

部分文獻(xiàn)：

[1]. Characterization of extracellular vesicles and synthetic nanoparticles with four orthogonal single‐particle analysis platforms. Journal of Extracellular Vesicles. 2021

[2]. WJMSC‐derived small extracellular vesicle enhance T cell suppression through PD‐L1. Journal of Extracellular Vesicles. 2021

[3]. Isolation and characterization of extracellular vesicle subpopulations from tissues. Nature protocols. 2021

[4]. Targeting tumor-derived exosomes using a lectin affinity hemofiltration device. Cancer Research. 2021

[5]. Small RNA Sequencing across Diverse Biofluids Identifies Optimal Methods for exRNA Isolation. Cell. 2019

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相關(guān)產(chǎn)品：
1、全自動(dòng)外泌體熒光檢測分析系統(tǒng)
http://www.lky1.cn/show1equip.asp?equipid=4749471
2、ExoView外泌體全面表征試劑盒
http://www.lky1.cn/show1equip.asp?equipid=4839430