![]() |
免疫熒光
免疫組織化學
免疫細胞化學
Western blotting
流式細胞術
原位雜交
電子顯微鏡
超級解析度顯微鏡
雙光子顯微鏡
ELISA |
Whole IgG抗體是從抗血清中分離出來的完整的分子。這些抗體有一個Fc部分和兩個與抗原結合的Fab部分,因此是二價的。Whole IgG抗體適用于多數情況,也是性價比最高的。
F(ab’)2片段抗體是用胃蛋白酶消化IgG去除Fc部分,剩下兩個靠二硫鍵連接的結合抗原的Fab部分(依然是二價的)。這些抗體用在特定的情況中,例如避免抗體與Protain A 或G結合,或者與有Fc受體的活細胞結合。
Fab片段抗體是用木瓜蛋白酶消化IgG后得到的。這些抗體只含有一個結合位點。它們用來封閉內源性的免疫球蛋白,或者在使用相同物種來源的一抗作多標記的實驗中,用于封閉暴露的免疫球蛋白。
如何選擇Jackson二抗?
Step1:三種形式親和純化的二抗的選擇——Whole IgG 、F(ab')2 片段或Fab片段;
Step2: 確定一抗的物種來源,抗體是根據一抗的物種來源的字母表順序排列。比如,如果一抗是小鼠來源的,就找“anti-mouse”;
Step3:選擇二抗的物種來源;
Step4:選擇二抗的特異性。 注意:不同來源的免疫球蛋白含有相似的結構,抗體的生成過程也相似。抗一個物種的抗體可能與其他物種發生交叉反應,除非事先特殊處理過-這時會標有“(min X …Sr Prot)。下面詞語的解釋將對選擇合適的抗體有所幫助:
Anti-IgG (H+L)
這類抗體和IgG分子的重鏈和輕鏈都可以反應,比如, 和IgG分子的Fc,F(ab’)2/Fab部分。Anti-IgG (H+L)抗體也可以和其他的免疫球蛋白家族反應(比如IgM和IgA),因為所有的免疫球蛋白都有相同的輕鏈(κ鏈,或者λ鏈)。Anti-IgG (H+L)抗體比只抗片段的抗體識別更多的抗原表位。
Anti-IgG,Fc fragment specific
這類抗體和IgG重鏈的Fc部分反應。它們通過了 ELISA檢測,和/或針對Fab片段吸附的測試。某些情況下,這類抗體需要額外檢測和處理來降低和IgM或IgA的交叉反應。在這種情況下(anti- human,-mouse,-rat),它們會被描述為“Anti-IgG, Fcγfragment specific”。
Anti-IgG,Fcγ Subclass specific
這類抗體分別和不同的小鼠IgG亞型重鏈的Fc部分反應。它們經過ELISA和/或針對Fab片段、IgM和其他小鼠IgG亞型的吸附測試。
Anti-IgG,F(ab’)2 fragment specific
這類抗體和IgG的F(ab’)2/Fab部分反應。它們經過了ELISA和/或Fc片段的吸附檢測。因為它們是和輕鏈反應,它們同時也和具有相同輕鏈的其他種類的免疫球蛋白反應(如IgM和IgA)。
(min X…Sr Prot)
這類抗體經過了檢測,以及針對IgG和圓括號中的物種的血清蛋白的吸附處理。當其他物種免疫球蛋白的出現可能導致交叉反應時,推薦使用這類抗體。但是,當要選擇經過針對相近物種吸附處理的抗體時,要特別注意,因為它們能識別的表位數量大大減小了,可能識別單抗的能力很弱。
ML (Multiple Labeling)
有些抗體標明了ML,來強調它們除了可以用于單標,還可用于多標記實驗。
Step5:選擇需要的探針;
熒光團:傳統與新型染料可選,包括Alexa Fluor® Fluorescent Dyes 、花青染料(Cy2, Cy3, and Cy5)、DyLight 405、Aminomethylcoumarin Acetate (AMCA)、luorescein Isothiocyanate (FITC) 、Tetramethyl Rhodamin Isothiocyanate(TRITC), Rhodamine Red-X (RRX), Texas Red (TR)等。
Table 1 Approximate peak wavelengths of excitation and emission for all fluorophore-conjugated.
熒光團的選擇依賴于:
A.儀器。比如,光源,濾片,檢測系統。
B.多標記中對色彩區分程度的要求。比如,為更好的區分Alexa Fluor® 488,選擇短發射波長熒光素DyLight 405或長發射波長熒光素羅丹明紅-X (RRX)、Alexa Fluor® 594或Alexa Fluor® 647。
C.要求的靈敏度。比如,Alexa Fluor® 488較之FITC更亮。
Biotin-SP (長連接的)
Biotin-SP是Jackson用來命名和其耦聯蛋白之間具有長連接的生物素。在使用Biotin-SP耦聯的抗體作酶免疫實驗時,相比沒有長連接的生物素標記的抗體,靈敏度有很明顯的提高。
酶
Jackson提供兩種不同的酶耦聯物:辣根過氧化物酶(HRP)和堿性磷酸脂酶。
HRP耦聯物是通過Nakane和Kawaoi過程制 備的。過氧化物酶耦聯物廣泛應用于免疫組化,Western blotting和ELISA中。堿性磷酸脂酶耦聯物是通過優化過的Avremeas方法制備的復合物,具有高有效濃度和高分子量。它們比較靈敏,適合于 固相的免疫檢測實驗比如ELISA和Western blotting。
Figure 2 A Product with the code number 115-096-072 should be described as above.
西寶生物抗原與抗體專業客戶團隊熱心為您服務!